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血細胞計數板的實驗原理及注意事項

閱讀:7036發布時間:2022-2-15

實驗原理  
在細胞培養工作中,常需要了解細胞生活狀態和鑒別細胞是否存活,確定細胞接種濃度和數量以及了解細胞活力和增殖狀況,如胰酶消化制備的細胞懸液中細胞存活率確定,凍存細胞復蘇后的活力檢測等。  
存活測試的原理為染料排除實驗,利用染料會滲入死細胞中而呈色,因活細胞細胞膜完整,染料無法滲入而不會呈色。一般使用臺盼藍染料,如果細胞不易吸收臺盼藍,則用赤蘚紅B。計算細胞活率:活細胞數/(活細胞數+死細胞數)×100%。計數應在臺盼藍染色后數分鐘內完成,隨時間延長,部分活細胞也開始攝取染料;因為臺盼藍與蛋白質有很強的親和力,用不含血清的稀釋液,可以使染色計數更為準確。  
注意事項  
滴細胞懸液時要干凈利落,加量要適當,過多易使蓋片漂移,或淹過蓋片也會失敗,應重做;過少易出現氣泡;不理想時,應重做。  
鏡下計數時,若方格中細胞分布明顯不均勻,說明細胞懸液混合不均勻,需重新將細胞懸液進行混合,再重新計數。  
計數時,對于位于邊線或交界處的細胞/細胞團,遵循“計上不計下,計左不計右”的規則。  
一個細胞團計做一個細胞。  
計數板計數時,最適濃度為5~10×105細胞/ml,此范圍外計數誤差偏大。高濃度細胞懸液,可取出部分作稀釋或連續稀釋后計數。如果細胞數目很少則要進行離心再懸浮于少量培養液中。

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