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Paxgene血液RNA管使用方法
閱讀:1024發(fā)布時間:2024-2-4
PAXgene血液RNA管旨在立即穩(wěn)定細胞內(nèi)RNA,從而產(chǎn)生準確且可重復的基因表達數(shù)據(jù)。PAXgene血液RNA管含有一種專有試劑,可在采集后立即穩(wěn)定細胞內(nèi)RNA。細胞內(nèi)RNA在室溫下穩(wěn)定長達三天或在2-8°C下穩(wěn)定長達五天。PAXgene試管可以在-20°C至-70°C的溫度下冷凍,以便長期儲存。
BD 762165 Paxgene血液RNA管使用方法:
1.將0.2-1.5mL新鮮或解凍后的抗凝全血加入到1.5mL塑料離心管中。
2.12,000rpm室溫離心3分鐘,棄上清(血漿)。如果此時血液細胞沉淀體積大于0.2mL,則需要減少血液的使用量,具體減少量需根據(jù)具體情況決定,因為各個個體(尤其是患者)血液中白細胞數(shù)目差別很大。
3.將1mL溶液A加入到血液細胞沉淀中,用移液槍吹打沉淀使細胞裂解。
4.將0.3mL的溶液B加入到離心管中,劇烈震蕩30秒。
5.和0.2mL氯仿加入到離心管中,劇烈震蕩30秒。
6.12,000rpm室溫離心3-5分鐘,將上清液(為無色或淺紅色,約0.5-0.9mL)轉(zhuǎn)移到另一干凈離心管中。為防止污染,建議留100uL左右的上清液。下層有機相一般呈深紅色,中間層為白色,含有DNA,蛋白質(zhì)和其他細胞破碎物,避免觸及或吸取。
7.在上清液中加入0.5mL的溶液C和0.2mL的自備氯仿,用手上下顛倒或振蕩器振蕩30秒混勻,此時溶液呈均勻的乳濁狀。振蕩器振蕩時必須使管底溶液震蕩起來。
8.室溫12,000rpm離心3分鐘,兩相間將有白色膜狀物(蛋白質(zhì))形成。
9.將上清液(約1mL)轉(zhuǎn)移到另一干凈的1.5mL塑料離心管中,避免觸及或吸取有機相及其上面的白色膜狀物。
10.在上清液中加入0.5倍體積的溶液D,用手上下顛倒或振蕩器振蕩30秒混勻。振蕩器振蕩時必須使管底溶液震蕩起來。
BD全血RNA管762165具有下列特點:
◆ 體外診斷使用,具有CE-IVD標志,符合歐盟98/79/EC 指令
◆ 整合的系統(tǒng),用于采集、穩(wěn)定和純化胞內(nèi)RNA
◆ 提供在分析工作進行之前的樣本標準化處理
◆ 在 18~25℃下,RNA穩(wěn)定可長達3天
◆ 在-20℃ 或 -70℃條件下至少穩(wěn)定50個月
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