重慶市華雅干細胞技術(shù)有限公司 |
12
15021010459
當(dāng)前位置:首頁>>技術(shù)中心>>技術(shù)文章>>一種重組人粒細胞刺激因子的生產(chǎn)方法
顏先生 (經(jīng)理)
- 電話:
- 400-021-2200
- 手機:
- 15021010459
- 傳真:
- 023-63419626
- 聯(lián)系我時,
- 告知來自化工儀器網(wǎng)
- 個性化:
- www.hystemcell.cn
- 商鋪網(wǎng)址:
- http://www.om600.com/st275923/
- 公司網(wǎng)站:
- https://www.ys-bio.cn/
一種重組人粒細胞刺激因子的生產(chǎn)方法
閱讀:277發(fā)布時間:2024-11-4
重組人粒細胞刺激因子(rG-CSF)的生產(chǎn)方法主要包括基因克隆、表達、純化和活性驗證等步驟。以下是一個典型的生產(chǎn)流程:
一、基因克隆
選擇合適的載體
使用能夠在宿主細胞中進行高效表達的質(zhì)粒載體,例如pET系列或pGEX系列。
基因獲取
從人類基因組中獲取G-CSF基因序列,或通過合成方法獲得。
PCR擴增
使用特異性引物對G-CSF基因進行PCR擴增,添加限制酶位點以便后續(xù)克隆。
克隆入載體
將擴增的G-CSF基因片段通過限制酶切割后,連接到選擇的載體中,形成重組質(zhì)粒。
二、轉(zhuǎn)化與表達
轉(zhuǎn)化宿主細胞
將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入適宜的表達宿主細胞(如大腸桿菌、酵母或哺乳動物細胞),以便進行蛋白表達。
誘導(dǎo)表達
根據(jù)選用的宿主,添加誘導(dǎo)劑(如IPTG)以誘導(dǎo)目標蛋白的表達。
培養(yǎng)細胞
在合適的培養(yǎng)基和條件下培養(yǎng)細胞,以提高重組蛋白的產(chǎn)量。
三、純化
細胞裂解
通過物理或化學(xué)方法裂解細胞,釋放重組G-CSF。
初步分離
采用離心等方法去除細胞碎片,獲得細胞裂解液。
純化步驟
進行多步純化,常用的方法包括:
親和層析:利用G-CSF與其特異性配體的結(jié)合進行純化。
離子交換層析:根據(jù)蛋白質(zhì)的電荷特性進一步純化。
凝膠過濾層析:根據(jù)分子大小進行最后的純化。
四、活性驗證
生物活性測試
通過體外細胞增殖實驗或其他生物學(xué)檢測方法驗證重組G-CSF的生物活性。
質(zhì)量檢測
對純化后的rG-CSF進行質(zhì)譜分析、SDS-PAGE等方法進行質(zhì)量檢測,確保其純度和分子量符合標準。
五、制劑與存儲
制劑開發(fā)
根據(jù)需要開發(fā)適宜的藥物制劑形式,如凍干粉或液體制劑。
存儲條件
確定合適的存儲條件,以保證重組G-CSF的穩(wěn)定性和活性。
通過上述步驟,可以有效地生產(chǎn)重組人粒細胞刺激因子,滿足臨床應(yīng)用的需求。
重慶市華雅干細胞技術(shù)有限公司主營產(chǎn)品:Lonza支原體檢測試劑盒,Stemcell胚胎干細胞培養(yǎng)基,StemRD生長分化因子
化工儀器網(wǎng) 設(shè)計制作,未經(jīng)允許翻錄必究.Copyright(C) http://www.om600.com, All rights reserved.
以上信息由企業(yè)自行提供,信息內(nèi)容的真實性、準確性和合法性由相關(guān)企業(yè)負責(zé),化工儀器網(wǎng)對此不承擔(dān)任何保證責(zé)任。 溫馨提示:為規(guī)避購買風(fēng)險,建議您在購買產(chǎn)品前務(wù)必確認供應(yīng)商資質(zhì)及產(chǎn)品質(zhì)量。