目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化指標檢測試劑盒>>生化試劑盒>> BC1120NADP蘋果酸酶(NADP-ME)活性檢測試劑盒
供貨周期 | 現貨 | 規格 | 50管/48樣 |
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貨號 | BC1120 | 應用領域 | 醫療衛生,化工,生物產業,石油 |
主要用途 | NADP蘋果酸酶(NADP-ME)活性檢測 |
產品規格:50管/48樣 產品商標:solarbio
保存與運輸:4℃保存或-20℃保存; 參考價格:420
庫存狀態:現貨
關鍵字:NADP蘋果酸酶試劑盒|活性檢測試劑盒|NADP-ME活性檢測|試劑盒
簡要介紹:
ME 廣泛存在于微生物、培養細胞、動物和植物胞漿中,尤其在植物組織中活性較高。ME 催 化蘋果酸氧化脫羧的可逆反應,產生丙tong酸和 CO2,以及伴隨 NAD(P)+的還原反應,是蘋果酸代謝 的關鍵酶。ME 活性與生物合成和抗氧化密切相關。近年來植物 ME 活性測定較多,已經成為抗氧 化研究的熱點。根據輔酶專一性和對底物特異性的不同,可將 ME 分為 NAD-ME(EC1.1.1.38)和 NADP-ME(EC1.1.1.40)。 NADP-ME 催化 NADP+還原成 NADPH,在 340nm 下測定 NADPH 增加速率。
產品詳細描述
產品內容:
提取液:液體 70mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 40mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×1 瓶,4℃保存;臨用前加入 20mL 提取液充分溶解備用;
試劑三:粉劑×2 支,4℃保存;用時每支加 1mL 雙蒸水充分溶解備用;
試劑四:粉劑×2 支,-20℃保存;用時每支加 500μL 雙蒸水充分溶解備用。
工作液:在 15mL 試劑二中加入 2mL 試劑三和 1mL 試劑四,可以根據比例現用現配。 產品說明:
ME 廣泛存在于微生物、培養細胞、動物和植物胞漿中,尤其在植物組織中活性較高。ME 催 化蘋果酸氧化脫羧的可逆反應,產生丙tong酸和 CO2,以及伴隨 NAD(P)+的還原反應,是蘋果酸代謝 的關鍵酶。ME 活性與生物合成和抗氧化密切相關。近年來植物 ME 活性測定較多,已經成為抗氧 化研究的熱點。根據輔酶專一性和對底物特異性的不同,可將 ME 分為 NAD-ME(EC1.1.1.38)和 NADP-ME(EC1.1.1.40)。 NADP-ME 催化 NADP+還原成 NADPH,在 340nm 下測定 NADPH 增加速率。
試驗中所需的儀器和試劑: 紫外分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、可調節移液器、1mL 石英比色皿、勻漿器和蒸餾水
操作步驟:
細菌、細胞或組織樣品的制備: 細菌或培養細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,棄上清,按照每 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取 液,超聲波破碎細菌或細胞(功率 20%,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次)。8000g 4℃離心 10min, 取上清,置冰上待測。
組織:稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,取上清,置 冰上待測。 血清(漿)樣品:直接檢測。
試劑名稱(μL) | 測定管 |
試劑一 | 600 |
工作液 | 270 |
樣本 | 30 |
將上述試劑按順序加入 1 mL 石英比色皿中,混勻后在 37℃(哺乳動物)或 25℃(其它物種), 340 nm 波長下記錄初始吸光度 A1 和反應 1min 后的吸光度 A2,計算ΔA=A2-A1。
注意事項:
單位的定義:每 mg 組織蛋白在反應體系中每分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為一個酶活力單位。
NADP-ME(U/mg prot)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×10 9]÷(Cpr×V 樣) ÷T=4823×ΔA÷Cpr
單位的定義:每 g 組織在反應體系中每分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為一個酶活力單位。
NADP-ME(U/g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×10 9]÷(V 樣÷V 樣總×W) ÷T =4823×ΔA÷W
單位的定義:每 mg 組織蛋白在反應體系中每分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為一個酶活力單位。
NADP-ME(U/mg prot)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×10 9]÷(Cpr×V 樣) ÷T=4823×ΔA÷Cpr
單位的定義:每 1 萬個細菌或細胞在反應體系中每分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為一個酶活力 單位。
NADP-ME(U/10 4 cell)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×10 9]÷(V 樣÷V 樣總×500) ÷T=9.65×ΔA。
單位的定義:每 mL 血清在反應體系中每分鐘生成 1 nmol NADPH 定義為一個酶活力單位。
NADP-ME(U/mL)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×10 9]÷V 樣÷T =4823×ΔA。 V 反總:反應體系總體積,9×10 -4 L;ε:NADPH 摩爾消光系數,6.22×10 3L/mol/cm;d:比色 皿光徑,1cm;V 樣:加入樣本體積,0.03 mL;V 樣總:加入提取液體積,1 mL;T:反應時間, 1min;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣品質量,g;500:細菌或細胞總數,500 萬。
相關文獻:
《Understanding the stress responses of Kluyveromyces marxianus after an arrest during high-temperature ethanol fermentation based on integration of RNA-Seq and metabolite data》 作者:Xiaofen Fu, Pengsong Li,Lei Zhang, Shizhong Li 期刊:Applied Microbiology and Biotechnology 影響因子:3.67 PMID:30673809
NADP蘋果酸酶(NADP-ME)活性檢測試劑盒