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DNS試劑說(shuō)明書

貨號(hào)：D7800

規(guī)格：100mL/500mL

保存：4°C避光保存，12個(gè)月有效。

產(chǎn)品說(shuō)明：

   植物體內(nèi)的碳素營(yíng)養(yǎng)狀況以及農(nóng)產(chǎn)品的品質(zhì)性狀，長(zhǎng)以糖含量作為重要指標(biāo)。單糖和某些寡糖（如麥芽糖）含有游離的醛基或酮基，具有還原性，屬于還原糖；多糖和蔗糖等屬于非還原糖。可以利用多糖能被酸水解為單糖的特性通過(guò)測(cè)定水解后的單糖含量對(duì)總糖進(jìn)行測(cè)定。

   DNS試劑是植物總糖和還原糖檢測(cè)（硝基水楊酸法）的成分之一，其檢測(cè)原理是還原糖在堿性條件下被氧化成糖酸，3,5-二硝基水楊酸被還原為棕紅色的氨基化合物。在一定范圍內(nèi)，還原糖的量與棕紅色產(chǎn)物的顏色深淺程度呈一定比例關(guān)系。在540nm處測(cè)定棕紅色物質(zhì)的吸光度，該吸光度值與還原糖含量呈線性關(guān)系，利用比色法和標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)得樣品中的還原糖和總糖的含量。本試劑僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

自備材料：

1、蒸餾水

2、50mL離心管

3、離心機(jī)

4、水浴鍋或恒溫箱

5、分光光度計(jì)

6、鹽酸溶液、氫氧化鈉溶液

操作步驟：（僅供參考）

1、還原糖的提取：

（1）稱取植物樣品0.5-3g，剪碎，加入蒸餾水約3mL勻漿，轉(zhuǎn)移至燒杯或三角瓶中，用12mL蒸餾水沖洗研磨器2-3次，洗出液也轉(zhuǎn)移至該容器。

（2）50°C水浴30min，并不時(shí)攪拌，以便還原糖*浸出。

（3）將沉淀和浸出液轉(zhuǎn)移至50mL離心管，4000g離心5min。

（4）留取上清液，向沉淀中加入20mL蒸餾水，混勻，再次4000g離心5min。

（5）留取上清液，將二次獲得的上清液合并，用蒸餾水定容至100mL（提取液），混勻，作為還原糖待測(cè)液。

2、總糖的水解和提取：

（1）稱取植物樣品0.5-3g，剪碎，加入蒸餾水約3mL勻漿，轉(zhuǎn)移至燒杯或三角瓶中，用12mL蒸餾水沖洗研磨器2-3次，洗出液也轉(zhuǎn)移至該容器。

（2）向容器中加入10mL 6M 鹽酸溶液，攪拌均勻，煮沸30min，并不時(shí)攪拌。

（3）取兩滴滴加于載玻片上，滴加一滴顯色液，檢查水解是否*，如已經(jīng)水解*，則不顯示藍(lán)色。

（4）水解完畢后，冷卻至室溫，加入6M氫氧化鈉溶液，使溶液pH至7.4，用蒸餾水定容至100mL，混勻，4000g離心5min或過(guò)濾。

（5）取上清或?yàn)V液10mL，用蒸餾水定容至100mL，成稀釋1000倍的總糖水解液（提取液），取1mL總糖水解液，測(cè)定其還原糖的含量。

3、制作葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線：取干凈離心管或試管，按下表進(jìn)行操作，以0號(hào)調(diào)零，檢測(cè)540nm處吸光度，以吸光度值為縱坐標(biāo)，各標(biāo)準(zhǔn)濃度（mg/mL）為橫坐標(biāo)作圖得標(biāo)準(zhǔn)曲線。

4、還原糖測(cè)定：取制備好的還原糖提取液或者總糖水解液1mL，分別加入DNS試劑2mL，其余操作同標(biāo)準(zhǔn)曲線的操作，540nm處測(cè)定各管的吸光度。

計(jì)算：

還原糖的百分含量（%）=（C×VT）/（m×VS）×100

總糖的百分含量：

總糖含量（%）=（C×VT）/（m×VS）×100×10×0.9

式中：C=從標(biāo)準(zhǔn)曲線查的糖量（mg）

     VT=提取液的體積（mL）

     m=植物樣品的質(zhì)量（mg）

     VS=測(cè)定時(shí)用的樣品體積（mL）

注意事項(xiàng)：

1、上述低溫試劑避免反復(fù)凍融，以免失效或效率下降。

2、待測(cè)樣本如不能及時(shí)測(cè)定，應(yīng)置于2-8°C保存，3天內(nèi)穩(wěn)定。

3、如果樣品還原糖濃度過(guò)高，應(yīng)用蒸餾水稀釋后重測(cè)，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。

4、總糖 計(jì)算公式在測(cè)定干擾雜質(zhì)很少、還原糖含量相對(duì)總糖含量很少時(shí)使用，×0.9是為了從測(cè)定出的總糖水解成單糖中，扣除水解時(shí)所消耗的水量。

相關(guān)文獻(xiàn):

[1] Yuxing Wu,Liangsheng Xu,Zhiyuan Yin,et al. Transcription factor VmSeb1 is required for the growth, development, and virulence in Valsa mali. Microbial Pathogenesis. October 2018;132-138. (IF 2.332)