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供貨周期 | 現貨 | 規格 | 100管/48樣 |
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貨號 | BC0175 | 應用領域 | 醫療衛生,化工,生物產業,石油 |
主要用途 | 超氧化物歧化酶(SOD)活性檢測 |
微量 超氧化物歧化酶(SOD)活性檢測試劑盒
產品名稱:超氧化物歧化酶測定試劑盒 微量法
產品英文名:Micro Superoxide dismutase(SOD) Assay Kit
產品貨號:BC0175 產地:北京市通州區馬駒橋聯東U谷8三樓
產品規格:100管/48樣 產品商標:solarbio
保存與運輸:4℃保存或-20℃保存; 參考價格:560
庫存狀態:現貨
關鍵字:超氧化物歧化酶試劑盒|超氧化物歧化酶|SOD|SOD活性檢測
簡要介紹:
SOD(EC 1.15.1.1)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,催化超氧化物陰離子發生岐化作用,生成H2O2和O2。SOD不僅是超氧化物陰離子清除酶,也是H2O2主要生成酶,在生物抗氧化系統中具有重要作用。通過黃嘌呤及黃嘌呤氧化酶反應系統產生超氧陰離子(O2-.),O2-.可還原氮藍四唑生成藍色甲臜,后者在560nm處有吸收;SOD可清除O2-.,從而抑制了甲臜的形成;反應液藍色越深,說明SOD活性愈低,反之活性越高。
產品內容:
提取液:
液體 100mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×1 瓶,4℃保存,用時加 13.2mL 雙蒸水配制成懸濁液,使用前充分搖勻;
試劑三:液體 100μL×1 支,4℃保存;
試劑四:液體 4mL×1 瓶,4℃保存。
試驗中所需的儀器和試劑: 可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、微量比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾水
產品說明:
SOD(EC1.15.1.1)是一種廣泛存在于生物體內的金屬酶,是重要的氧自由基清除劑,能催化超 氧化物陰離子發生岐化作用,生成 H2O2和 O2。SOD 不僅是超氧化物陰離子清除酶,也是 H2O2主要 生成酶,在生物抗氧化系統中具有重要作用。 通過黃嘌呤及黃嘌呤氧化酶反應系統產生超氧陰離子(O2-),O2-可還原氮藍四唑生成藍色甲臜, 后者在 560nm 處有吸收;SOD 可清除 O2-,從而抑制了甲臜的形成;反應液藍色越深,說明 SOD 活 性愈低,反之活性越高。
操作步驟:
一、樣品的前處理:
1. 細菌或培養細胞:收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清,按照細菌或細胞數量(104個): 提取液體積(mL)為 500-1000:1 的比例(建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液),超聲波破 碎細菌或細胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次), 8000g4℃離心 10min, 取上清,置冰上待測。
2. 組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為 1:5-10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液),進行冰浴勻漿;8000g4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
3. 血清(漿)樣品:直接檢測。
二、測定步驟:
1. 分光光度計預熱 30min 以上,調節波長 560nm,蒸餾水調零。
2. 測定前將試劑一、二和四 37℃(哺乳動物)或 25℃(其它物種)水浴 5min 以上。
3. 樣本測定(按順序加入下列試劑)
測定管 | 對照管 | 空白管1 | 空白管2 | |
試劑一(μL) | 45 | 45 | 45 | 45 |
試劑二(μL) | 100 | 100 | 100 | 100 |
試劑四(μL) | 35 | 35 | 35 | 35 |
樣 品 (μL) | 18 | 18 | ||
雙蒸水(μL) | 2 | 18 | 20 | |
試劑三(μL) | 2 | 2 |
充分混勻,室溫靜置 30min 后,560nm 處測定各管吸光值 A。計算ΔA 測定=A 測定-A 對照,Δ A 空白=A 空 1-A 空 2。如底部有沉淀,混勻后再行測定。
注意:
1、試劑二為懸濁液,注意混勻后加入。試劑三為酶,不可冷凍,使用時在冰上放置。
2、樣本較多時,可按表格配置工作液(包含試劑一、二、四),試劑三必須后加入。
3、空白管 1 和空白管 2 各只需做 1~2 管;每個樣本有一個對照管。
4、反應完成后,可能有沉淀生成,混勻后測定即可。
三、SOD 活性計算:
1、 抑制百分率的計算 抑制百分率=( ΔA 空白-ΔA 測定)÷ΔA 空白×100% 盡量使樣品的抑制百分率在 30-70%范圍內,越靠近 50%越準確。如果計算出來的抑制百分率小 于 30%或大于 70%,則通常需要調整加樣量后重新測定。如果測定出來的抑制百分率偏高,則需適 當稀釋樣品;如果測定出來的抑制百分率偏低,則需重新準備濃度比較高的待測樣品。
2、 SOD 酶活性單位:在上述黃嘌呤氧化酶藕聯反應體系中抑制百分率為 50%時,反應體系中 的 SOD 酶活力定義為一個酶活力單位。
3、 SOD 酶活性計算:
(1) 血清(漿)SOD 活性(U/mL)=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V 反總]÷V 樣×樣本稀釋倍數 =11.4×抑制百分率÷(1-抑制百分率)×樣本稀釋倍數
(2)組織、細菌或培養細胞 SOD 活力計算:
A 按樣本蛋白濃度計算 SOD 活性(U/mgprot)=〔抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V 反總〕÷(V 樣×Cpr)×樣本稀釋倍數 =11.4×抑制百分率÷(1-抑制百分率)÷Cpr×樣本稀釋倍數
B 按樣本鮮重計算 SOD 活性(U/g 鮮重)=〔抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V 反總〕÷(W×V 樣÷V 樣總)×樣本稀釋倍數 =11.4×抑制百分率÷(1-抑制百分率)÷W×樣本稀釋倍數 C 按細菌或細胞個數計算 SOD 活力(U/104cell)=〔抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V 反總〕÷(500×V 樣÷V 樣總)×樣本稀釋倍數 =0.0228×抑制百分率÷(1-抑制百分率)×樣本稀釋倍數
V 反總:反應體系總體積,1.026mL;V 樣:加入反應體系中樣本的體積,0.09mL;V 樣總:加 入提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣品質量,g;500:細胞或細菌總數, 500 萬。
相關文獻:
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SOD(EC1.15.1.1)是一種廣泛存在于生物體內的金屬酶,是重要的氧自由基清除劑,能催化超 氧化物陰離子發生岐化作用,生成 H2O2和 O2。SOD 不僅是超氧化物陰離子清除酶,也是 H2O2主要 生成酶,在生物抗氧化系統中具有重要作用。 通過黃嘌呤及黃嘌呤氧化酶反應系統產生超氧陰離子(O2-),O2-可還原氮藍四唑生成藍色甲臜, 后者在 560nm 處有吸收;SOD 可清除 O2-,從而抑制了甲臜的形成;反應液藍色越深,說明 SOD 活 性愈低,反之活性越高。
SOD(EC1.15.1.1)是一種廣泛存在于生物體內的金屬酶,是重要的氧自由基清除劑,能催化超 氧化物陰離子發生岐化作用,生成 H2O2和 O2。SOD 不僅是超氧化物陰離子清除酶,也是 H2O2主要 生成酶,在生物抗氧化系統中具有重要作用。 通過黃嘌呤及黃嘌呤氧化酶反應系統產生超氧陰離子(O2-),O2-可還原氮藍四唑生成藍色甲臜, 后者在 560nm 處有吸收;SOD 可清除 O2-,從而抑制了甲臜的形成;反應液藍色越深,說明 SOD 活 性愈低,反之活性越高。
SOD(EC1.15.1.1)是一種廣泛存在于生物體內的金屬酶,是重要的氧自由基清除劑,能催化超 氧化物陰離子發生岐化作用,生成 H2O2和 O2。SOD 不僅是超氧化物陰離子清除酶,也是 H2O2主要 生成酶,在生物抗氧化系統中具有重要作用。 通過黃嘌呤及黃嘌呤氧化酶反應系統產生超氧陰離子(O2-),O2-可還原氮藍四唑生成藍色甲臜, 后者在 560nm 處有吸收;SOD 可清除 O2-,從而抑制了甲臜的形成;反應液藍色越深,說明 SOD 活 性愈低,反之活性越高。
SOD(EC1.15.1.1)是一種廣泛存在于生物體內的金屬酶,是重要的氧自由基清除劑,能催化超 氧化物陰離子發生岐化作用,生成 H2O2和 O2。SOD 不僅是超氧化物陰離子清除酶,也是 H2O2主要 生成酶,在生物抗氧化系統中具有重要作用。 通過黃嘌呤及黃嘌呤氧化酶反應系統產生超氧陰離子(O2-),O2-可還原氮藍四唑生成藍色甲臜, 后者在 560nm 處有吸收;SOD 可清除 O2-,從而抑制了甲臜的形成;反應液藍色越深,說明 SOD 活 性愈低,反之活性越高。
SOD(EC1.15.1.1)是一種廣泛存在于生物體內的金屬酶,是重要的氧自由基清除劑,能催化超 氧化物陰離子發生岐化作用,生成 H2O2和 O2。SOD 不僅是超氧化物陰離子清除酶,也是 H2O2主要 生成酶,在生物抗氧化系統中具有重要作用。 通過黃嘌呤及黃嘌呤氧化酶反應系統產生超氧陰離子(O2-),O2-可還原氮藍四唑生成藍色甲臜, 后者在 560nm 處有吸收;SOD 可清除 O2-,從而抑制了甲臜的形成;反應液藍色越深,說明 SOD 活 性愈低,反之活性越高。
微量 超氧化物歧化酶(SOD)活性檢測試劑盒