目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化指標(biāo)檢測試劑盒>>生化試劑盒>> BC0360β-1,3葡聚糖酶(β-1,3-GA)活性檢測試劑盒
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50管/24樣 |
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貨號 | BC0360 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),石油 |
主要用途 | β-1,3葡聚糖酶(β-1,3-GA)活性檢測 |
β-1,3葡聚糖酶(β-1,3-GA)活性檢測試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格:100管/96樣 產(chǎn)品商標(biāo):solarbio
保存與運(yùn)輸:4℃保存或-20℃保存; 參考價(jià)格:650
庫存狀態(tài):現(xiàn)貨
關(guān)鍵字:谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶| GST活性檢測|試劑盒|微量法
簡要介紹:
GST是一種具有多種生理功能的蛋白質(zhì)家族,主要存在于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。GST是體內(nèi)解毒酶系統(tǒng)的重要組成部分,主要催化各種化學(xué)物質(zhì)及其代謝產(chǎn)物與GSH的巰基共價(jià)結(jié)合,使親電化合物變?yōu)橛H水物質(zhì),易于從膽汁或尿液中排泄,達(dá)到將體內(nèi)各種潛在或具備毒性的物質(zhì)降解并排出體外的目的。因此,GST在保護(hù)細(xì)胞免受親電子化合物的損傷中發(fā)揮著重要的生物學(xué)功能。此外,因?yàn)镚ST具有GSH-Px活性,亦稱為non-Se GSH-Px,具有修復(fù)氧化破壞的大分子如DNA、蛋白質(zhì)等的功能。注意,GST催化的反應(yīng)減少GSH含量,但是不增加GSSG含量。
產(chǎn)品詳細(xì)描述
商品貨號: | 商品品牌: | 規(guī)格 | 基本售價(jià): | 選擇規(guī)格 |
BC0355- 100管/96樣 | Solarbio | 100管/96樣 | 650.00元 |
產(chǎn)品內(nèi)容:
試劑一:液體 100mL×1 瓶,4℃保存。
試劑二:液體 22mL×1 瓶,4℃保存。
試劑三:粉劑×1 瓶,4℃保存。臨用前加 2 mL 蒸餾水溶解。
產(chǎn)品說明:
GST 是一種具有多種生理功能的蛋白質(zhì)家族,主要存在于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。GST 是體內(nèi)解毒酶系統(tǒng)的 重要組成部分,主要催化各種化學(xué)物質(zhì)及其代謝產(chǎn)物與 GSH 的巰基共價(jià)結(jié)合,使親電化合物變?yōu)?親水物質(zhì),易于從膽汁或尿液中排泄,達(dá)到將體內(nèi)各種潛在或具備毒性的物質(zhì)降解并排出體外的目 的。因此,GST 在保護(hù)細(xì)胞免受親電子化合物的損傷中發(fā)揮著重要的生物學(xué)功能。此外,因?yàn)?GST 具有 GSH-Px 活性,亦稱為 non-Se GSH-Px,具有修復(fù)氧化破壞的大分子如 DNA、蛋白質(zhì)等的功能。 注意,GST 催化的反應(yīng)減少 GSH 含量,但是不增加 GSSG 含量。 GST 催化 GSH 與 CDNB 結(jié)合,其結(jié)合產(chǎn)物的光吸收峰波長為 340nm;通過測定 340nm 波長處 吸光度上升速率,即可計(jì)算出 GST 活性。
自備儀器和用品: 低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器、紫外-可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔 UV 板和蒸餾水。
操作步驟:
一、粗酶液提取:
1. 組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 試劑一)進(jìn)行冰浴勻漿。8000g,4℃離心 10min,取上清置冰上待測。
2. 細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(10 4個(gè)):試劑一體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬 細(xì)胞加入 1mL 試劑一),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率 300w,超聲 3 秒,間隔 7 秒,總時(shí)間 3min); 然后 8000g,4℃,離心 10min,取上清置于冰上待測。
3. 血清等液體:直接測定。
二、測定:
1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30 min 以上,調(diào)節(jié)波長到 340 nm,用蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二放在 25℃(一般物種)或者 37℃(哺乳動(dòng)物)保溫。
3. 空白管:取微量石英比色皿,加入 20μL 試劑一,180μL 試劑二和 20μL 試劑三,迅速混勻后于 340nm 測定 10 s 吸光度記 A1,37℃水浴 5min 后,快速取出測定吸光度記 A2。 4. 測定管:取微量石英比色皿,加入 20μL 上清液,180μL 試劑二和 20μL 試劑三,迅速混勻后于 340nm 測定 10 s 吸光度記 A3,37℃水浴 5min 后,快速取出測定吸光度記 A4。
三、GST 活性計(jì)算:
a.使用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下
(1)按蛋白濃度計(jì)算
活性單位定義:在 25℃或者 37℃中,每毫克蛋白每分鐘催化 1μmol CDNB 與 GSH 結(jié)合為一個(gè)酶活 性單位。
GST(U/mg prot)=[(A4-A3)-(A2-A1)]÷(ε×d)×10 6×V 反總÷(Cpr×V 樣)÷T =0.23×[(A4-A3)-(A2-A1)] ÷Cpr
(2)按樣本鮮重計(jì)算
活性單位定義:在 25℃或者 37℃中,每克樣品每分鐘催化 1μmol CDNB 與 GSH 結(jié)合為一個(gè)酶活性 單位。
GST(U/g 鮮重)=[(A4-A3)-(A2-A1)]÷(ε×d)×10 6×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)÷T =0.23×[(A4-A3)-(A2-A1)] ÷W
(3)按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
活性單位定義:在 25℃或者 37℃中,每 10 4個(gè)細(xì)胞每分鐘催化 1μmol CDNB 與 GSH 結(jié)合為一個(gè)酶 活單位。
GST(U/10 4 cell)=[(A4-A3)-(A2-A1)]÷ε÷d×10 6×V 反總÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T =0.23×[(A4-A3)-(A2-A1)] ÷500
(4)按液體體積計(jì)算
活性單位定義:在 25℃或者 37℃中,每毫升液體每分鐘催化 1μmol CDNB 與 GSH 結(jié)合為一個(gè)酶活 單位。
GST(U/mL)=[(A4-A3)-(A2-A1)]÷ε÷d×10 6×V 反總÷V 樣÷T =0.23×[(A4-A3)-(A2-A1)] ε:產(chǎn)物摩爾消光系數(shù),9.6×10 3 L/mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;10 6:1mol=1×10 6μmol;V 反總:反應(yīng)體系總體積,220μL=2.2×10 -4 L;Cpr:上清液蛋白質(zhì)濃度(mg/mL),需要另外測定,建 議選用本公司生產(chǎn)的 BCA 蛋白質(zhì)濃度測定試劑盒;W :樣品質(zhì)量,g;V 樣:加入反應(yīng)體系中上清 液體積,20μL=0.02 mL;V 樣總:試劑一體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間(min),5min;500:細(xì)胞數(shù)量, 500 萬。
b.使用 96 孔板測定的計(jì)算公式如下
(1)按蛋白濃度計(jì)算
活性單位定義:在 25℃或者 37℃中,每毫克蛋白每分鐘催化 1μmol CDNB 與 GSH 結(jié)合為一個(gè)酶活 性單位。
GST(U/mg prot)=[(A4-A3)-(A2-A1)]÷(ε×d)×10 6×V 反總÷(Cpr×V 樣)÷T =0.38×[(A4-A3)-(A2-A1)] ÷Cpr
(2)按樣本鮮重計(jì)算
活性單位定義:在 25℃或者 37℃中,每克樣品每分鐘催化 1μmol CDNB 與 GSH 結(jié)合為一個(gè)酶活性 單位。
GST(U/g 鮮重)=[(A4-A3)-(A2-A1)]÷(ε×d)×10 6×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)÷T =0.38×[(A4-A3)-(A2-A1)] ÷W
(3)按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
活性單位定義:在 25℃或者 37℃中,每 10 4個(gè)細(xì)胞每分鐘催化 1μmol CDNB 與 GSH 結(jié)合為一 個(gè)酶活單位。
GST(U/10 4 cell)=[(A4-A3)-(A2-A1)]÷ε÷d×10 6×V 反總÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T =0.38×[(A4-A3)-(A2-A1)] ÷500
(4)按液體體積計(jì)算
活性單位定義:在 25℃或者 37℃中,每毫升液體每分鐘催化 1μmol CDNB 與 GSH 結(jié)合為一個(gè) 酶活單位。
GST(U/mL)=[(A4-A3)-(A2-A1)]÷ε÷d×10 6×V 反總÷V 樣÷T =0.38×[(A4-A3)-(A2-A1)] ε:產(chǎn)物摩爾消光系數(shù),9.6×10 3 L/mol /cm;d:96 孔板光徑,0.6cm;10 6:1mol=1×10 6μmol;
V 反總:反應(yīng)體系總體積,220μL=2.2×10 -4 L;Cpr:上清液蛋白質(zhì)濃度(mg/mL),需要另外測定,建 議選用本公司生產(chǎn)的 BCA 蛋白質(zhì)濃度測定試劑盒;W :樣品質(zhì)量;V 樣:加入反應(yīng)體系中上清液 體積,20μL=0.02 mL;V 樣總:試劑一體積,1 mL;T:反應(yīng)時(shí)間(min),5min;500:細(xì)胞數(shù)量, 500 萬。
注意事項(xiàng):
1. 樣品處理等過程均需要在冰上進(jìn)行,且須在當(dāng)日測定酶活力;
2. 細(xì)胞中 GST 活性測定時(shí),細(xì)胞數(shù)目須在 300 萬-500 萬之間,細(xì)胞中 GST 的提取時(shí)可加試劑一后 研磨或超聲波處理,不能用細(xì)胞裂解液處理細(xì)胞;
3. 測定前先用 1~2 個(gè)樣做預(yù)實(shí)驗(yàn),如 5min 內(nèi)反應(yīng)不成線性,須對樣品用蒸餾水稀釋,計(jì)算結(jié)果乘 以稀釋倍數(shù);
4. 若樣品測定吸光度大于 1,建議對樣品用蒸餾水稀釋,計(jì)算時(shí)結(jié)果乘以稀釋倍數(shù);
5. 測定反映的溫度對測定結(jié)果有影響,請控制在 25℃或者 37℃(哺乳動(dòng)物)。
相關(guān)文獻(xiàn):
《Chronic toxicity and biochemical response of Apis cerana cerana (Hymenoptera: Apidae) exposed to acetamiprid and propiconazole alone or combined》 作者:Wensu Han,Yemeng Yang,Jinglin Gao,Dongxiang Zhao,Chengcai Ren,Shijie Wang,Shan ZhaoYihai Zhong 期刊:Ecotoxicology 影響因子:2.46 PMID:30874992
《Systemic response of the stony coral Pocillopora damicornis against acute cadmium stress》 作者:Zhi Zhou,Xiaopeng Yua,Jia Tang,Yibo Wu,Lingui Wang,Bo Huang 期刊:Aquatic Toxicology 影響因子:3.794 PMID:29179148
《Transcriptome Sequence Analysis Elaborates a Complex Defensive Mechanism of Grapevine (Vitis vinifera L.) in Response to Salt Stress》 作者:Le Guan , Muhammad Salman Haider , Nadeem Khan , Maazullah Nasim , Songtao Jiu , Muhammad Fiaz , Xudong Zhu , Kekun Zhang and Jinggui Fang 期刊:International Journal of Molecular Sciences 影響因子:4.183 PMID:30545146
《2′,4′-Dihydroxy-6′-methoxy-3′,5′-dimethylchalcone, a potent Nrf2/ARE pathway inhibitor, reverses drug resistance by decreasing glutathione synthesis and drug efflux in BEL-7402/5-FU cells》 作者:Xing Wei,Xuejun Mo,Faliang An,Xiang Ji,Yanhua Lu 期刊:Food and Chemical Toxicology 影響因子:3.775 PMID:29626576
《A Damaged Oxidative Phosphorylation Mechanism Is Involved in the Antifungal Activity of Citral against Penicillium digitatum》 作者:Qiuli OuYang, Nengguo Tao* and Miaoling Zhang 期刊:Frontier in Immunology 影響因子:4.259 PMID:29503638
《Cadmium detoxification induced by salt stress improves cadmium tolerance of multi-stress-tolerant Pichia kudriavzevii》 作者:Chunsheng Li,Xianqing Yang,Ying Xu,Laihao Li,Yueqi Wang 期刊:Environmental Pollution 影響因子:5.714 PMID:30036838
《Effects of Phytase Transgenic Maize on the Physiological and Biochemical Responses and the Gut Microflora Functional Diversity of Ostrinia furnacalis》 作者:Xiao Hui Xu, Yinghui Guo, Hongwei Sun, Fan Li, Shuke Yang, Rui Gao & Xingbo Lu 期刊:Scientific Reports 影響因子:4.011 PMID:29535326
β-1,3葡聚糖酶(β-1,3-GA)活性檢測試劑盒
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