目錄:北京索萊寶科技有限公司>>基因工程>> I8070基因工程產品 IPTG
| CAS | 367-93-1 | 純度 | ≥99.0% |
|---|---|---|---|
| 分子量 | 238.31 | 分子式 | C9H18O5S |
| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 5g |
| 貨號 | I8070 | 應用領域 | 醫療衛生,化工,生物產業,石油 |
| 主要用途 | 異丙基-β-D-硫代半乳糖苷,英文名稱IPTG。為安慰性誘導物,X-gal為生色 |
基因工程產品 IPTG
貨號：I8070
規格：1g/5g/100g
異丙基硫代半乳糖苷（IPTG）是一種作用*的誘導劑，不被細菌代謝而十分穩定，因此被實驗室廣泛應用。當有乳糖存在時，lac操縱子（元）即可被誘導。在這個操縱子（元）體系中，真正的誘導劑并非乳糖本身。乳糖進入細胞，經b－半乳糖苷酶催化，轉變為半乳糖。后者作為一種誘導劑分子結合阻遏蛋白，使蛋白構象變化，導致阻遏蛋白與O序列解離、發生轉錄。
實驗方案
1、外源基因的誘導表達
( 1 ）用適當的限制性內切核酸酶消化載體DNA 和目的基因。
( 2 ）按連接步驟連接目的基因和載體，并轉化到相應的宿主菌。
( 3 ）篩選出含重組子的轉化菌落，提取質粒DNA 作限制性內切核酸酶圖譜，DNA 序列測定確定無誤后進行下一步。
( 4 ）如果表達載體的原核啟動子為PL 啟動子，則在30 -32 ℃ 培養數小時，使培養液的OD600達0.4-0.6 ，迅速使溫度升42 ℃ 繼續培養3 -5h ；如果表達載體的原核啟動子為tac 等，則37 ℃培養細菌數小時達到對數生長期后加IPTG 終濃度為1 mmol / L。繼續培養3 -5h 。
( 5 ）取上述培養液1 mL , 1000g 離心，1 min ，沉淀，加100 μL 聚丙烯酰胺凝膠電泳上樣緩沖液后，作SDS -PAGE 檢測。
2、大腸桿菌包涵體的分離與蛋白質純化
1 ）細菌的裂解
常用方法有：① 高溫珠磨法；② 高壓勻漿；③ 超聲破碎法；④ 酶溶法；⑤ 化學滲透等。前三種方法屬機械破碎法，并且方法① 、② 已在工業生產中得到應用，后三種方法在實驗室研究中應用較為廣泛。下面介紹酶溶法和超聲破碎法的實驗步驟。
（1）酶溶法。常用的溶解酶有溶菌酶；β-1,3 -葡聚糖酶；β-1,6 -葡聚糖酶；蛋白酶；殼多糖酶；糖昔酶等。溶菌酶主要對細菌類有作用，而其他幾種酶對酵母作用顯著。
主要步驟為：
① 4 ℃ ，5000rpm 離心，15 min ，收集誘導表達的細菌培養液（100 mL ）。棄上清，約每克濕菌加3 mL 裂解緩沖液，懸浮沉淀。
注意事項：培養噬菌體時，Top agar中的添加量為：25 μl/3 ml(24 mg/ml)。含有IPTG的培養基4℃避光保存，須在1~2 周內使用。
保存：IPTG要2-8°C冷藏保存，配制好后保存于-20°C，室溫可放置一個月。遠離熱源及氧化劑。
異丙基-β-D-硫代半乳糖苷,英文名稱IPTG。為安慰性誘導物，X-gal為生色底物，二者共同用于藍白斑篩選。IPTG可誘導載體lac操縱子DNA區段合成β-半乳糖苷酶氨基端片段，該片段可與宿主細胞編碼的缺陷型β-半乳糖苷酶實現基因內互補(α互補)。實現α互補的細菌暴露IPTG，鋪在含有X-gal生色底物的培養基上，可形成藍色菌落。外源DNA插入質粒的多克隆位點后可破壞α互補作用,將產生白色菌落。
特性：純度 ：≥99.0% (TLC) 熔點：110-114℃
濕度(%)：≤1.0 pH (5%, 水)25℃：5-7
比旋光度 (1%, 水)：-34.0--29.0
溶解性：IPTG貯存液，先在8ml蒸餾水中溶解2g，定溶10ml，用0.22um濾器過濾除菌，貯存于-20℃。
基因工程產品 IPTG
參考文獻：
《Engineering an electroactive Escherichia coli for the microbial electrosynthesis of succinate from glucose and CO2》 作者:Zaiqiang Wu,Junsong Wang, Jun Liu, Yan Wang, Changhao Bi, Xueli Zhang 期刊:Microbial Cell Factories 影響因子:4.402 PMID:30691454
《Engineering an electroactive Escherichia coli for the microbial electrosynthesis of succinate by increasing the intracellular FAD pool》 作者:Zaiqiang Wu,Junsong Wang,Xueli Zhang,Changhao Bi 期刊:Biochemical Engineering Journal 影響因子:3.371 PMID:
《Identification of the O-GalNAcylation site(s) on FOXA1 catalyzed by ppGalNAc-T2 enzyme in vitro》 作者:Siqi Zhang,Lijuan,Bai,Qiushi Chen,Yan Ren,Keren Zhang,Qiong Wu,Huang Huang,Wenli Li ,Yan Zhang,Jianing Zhang,Yubo Liu 期刊:Biochemical and Biophysical Research Communications 影響因子:2.705 PMID:31029427
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