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細胞培養試劑人或各種動物外周血及臟器組織中性粒細胞分離液
規格：200ml/kit
保存：室溫避光儲存，有效期少 2 年。

產品簡介：
    本品為帶有乳光或微乳光的滅菌水溶液。主要成分是Ficoll 400與泛影酸葡甲胺。適用于從人或各種動物血液及臟器組織中分離中性粒細胞，在醫療和醫學生物學研究中廣泛應用。
其他人及動物多種比重細胞分離液。注：因不同種屬不同比重分離液的細胞離散系數及細胞帶電不同，所以用戶在定制分離液時應提供所需分離液的比重、動物的種屬及被分離細胞的名稱。
一、  分離方法說明及圖例
     A． 取1ml新鮮抗凝血，與全血及組織稀釋液1:1 混勻后小心加于1份本分離液之液面上；
或取 1ml 組織單細胞懸液（具體制備方法詳見二、組織單細胞懸液的制備）小心加于1份本分離液之液面上；
     B. 以500g（約1800轉/分）離心25分鐘(半徑15cm水平轉子)。
此時離心管中由上下細胞分為四層。*層；為血漿層。第二層；為環狀乳白色單個核細胞層。第三層；為略帶渾濁的分離液層（富集一定量的中性粒細胞）。第四層；為紅細胞層。棄去*層血漿層及第二層細胞，收集第三層分離液層和第四層紅細胞層，放入含細胞洗滌液10ml的試管中，充分混勻后，以500g（約1800轉/分）離心30分鐘，沉淀經1次洗滌后用紅細胞裂解液裂解紅細胞，再經3次洗滌去除紅細胞內溶物和碎片后取沉淀細胞即為所需中性粒細胞。
     注：A. 細胞提取率約 80%。
         B. 紅細胞裂解過程參考“紅細胞裂解液使用說明” 。

二、組織單細胞懸液的制備
     注：A.本說明只提供機械勻漿制備單細胞懸液的方法 本說明只提供機械勻漿制備單細胞懸液的方法，酶消化法由于各實驗室選取的消化酶種類各不相同，請各實驗室自行選擇進行試驗。
     B. 全過程及所需試劑要求無菌環境 全過程及所需試劑要求無菌環境。
剪碎法：將組織塊放入平皿后，加入少量組織勻漿液及20%胎牛血清；用眼科剪將組織剪勻漿狀，加入5ml組織勻漿液及20%胎牛血清；用吸管吸取組織勻漿，用100目不銹鋼濾網過濾到試管內；離心沉淀1500轉/分×3 min，再用細胞洗滌液清洗3次，每次以500rpm短時低速離心除去細胞碎片，以200目不銹鋼濾網過濾去細胞團塊。作細胞計數并調整細胞濃度為（2～5）×10 7 個/ml。常溫下放置, 待測細胞的活力。分離前用20%胎牛血清或全血及組織稀釋液懸起細胞濃度為2×108-1×10 9 個/ml的單細胞懸液備用。
      勻漿器法：用眼科剪將組織剪成小塊；放入70ml組織研磨器內，加入2ml組織勻漿液及20%胎牛血清；緩慢轉動研棒，研磨勻漿；用5ml組織勻漿液及20%胎牛血清沖洗研器；收集細胞懸液，經200目不銹鋼濾網過濾；離心沉淀800rpm×2min ，再用細胞洗滌液洗3次，離心沉淀。作細胞計數并調整細胞濃度為（2～5）×10 7 個/ml。常溫下放置, 待測細胞的活力。分離前用20%胎牛血清或全血及組織稀釋液懸起細胞濃度為2×10 8 -1×10 9 個/ml的單細胞懸液備用。

細胞計數方法:
    細胞計數法是用來計數細胞懸液中細胞數量的一種方法。一般利用計數板（血球計數板）進行。既可用于分離（散）細胞培養接種前計數所制備的細胞懸液中的細胞數量，也可用于對培養物的細胞數量進行計數。不論計數的對象如何，均須制備分散的細胞懸液。

計數與計算過程
    1）、在細胞計數板中央放置計數的蓋玻片。
    2）、用玻璃虹吸管吸取細胞，讓虹吸管在蓋玻片上或下側的計數板凹蹧處流出懸液，蓋玻片被液體充滿為止。
    3）、置顯微鏡下計數四角大方格內的細胞總數。對于壓線的細胞只計數在上線和左線者，對于細胞團按單個細胞計數。
    4）、按下式計數細胞懸液的密度： 細胞密度＝（4個大格細胞總數/4）×10 4 個/ml×稀釋倍數公式中乘以10 4 因為計數板中每一個大格的體積為：
      1.0mm（長）×1.0mm（寬）×0.1mm（高）＝0.1mm 3 而 1ml＝1000mm 3
 

細胞計數要點：
    A． 進行細胞計數時，要求懸液中細胞數目不低于10 4 個/ml，如果細胞數目很少要進行離心再懸浮于少量培養液中；顯微鏡下計數時，遇到2個以上細胞組成的細胞團，應按單個細胞計算。如果細胞團>10％，說明細胞分散不充分; 或細胞數<200個/10mm 2 或>500個/10 mm 2 時，說明稀釋不當，需重新制備細胞懸液。
    B． 要求細胞懸液中的細胞分散良好，否則影響計數準確性。
    C． 取樣計數前，應充分混勻細胞懸液，尤其是多次取樣計數時更要注意每次取樣都要混勻，以求計數準確；
    D． 數細胞的原則是只數完整的細胞，若細胞聚集成團時，只按照一個細胞計算。如果細胞壓在格線上時，則只計上線，不計下線，只計左線，不計右線。
    E． 操作時，注意蓋玻片下不能有氣泡，也不能讓懸液流入旁邊槽中，否則要重新計數。
 

三、  注意事項
    A． 本分離液是敏光型的，在運輸和貯藏過程中應在18℃-25℃避光保存，啟封后置4℃保存避免微生物污染。另外，本品為真空包裝，未啟封前置于10℃ 以下易出現白色結晶，影響分離效果。
    B． 待分離的樣本要求新鮮，避免冷凍和冷藏。分離液和所分離樣本一定在20℃水浴箱中復溫20 分鐘保證分離液和所分離樣本溫度在20℃±2℃時分離效果好，且所有操作過程一定要在無菌條件下進行。
    C． 由于各品牌離心機的性能不同，國內南北地區溫度環境和四季的差異，可能影響分離效果，用戶可以調節離心轉數，調節離心的時間，摸索的分離條件（具體分離條件各實驗室自定）。
    D． 好使用無靜電反應的離心管，推薦使用未經過堿處理的玻璃離心管。
    E． 優抗凝劑選擇：EDTA、枸櫞酸、肝素。應注意在血液稀釋過程中應去除抗凝劑體積 。
 

四、產品性能指標

pH 7.0-7.5
滲透壓 280-340mOsmol/kg
內毒素 ≤0.5EU/ml
無菌 直接接種培養14 天后培養基澄清
澄明度及不溶性顆粒物 每50ml 溶液中含10μm 以上的不溶性微粒20 粒以下，
含25μm 以上的不溶性微粒5 粒以下

五、貯藏及保存期限
    18℃-25℃避光保存，有效期兩年。啟封后置4℃保存，有效期一周。
    注：若保證無微生物污染，啟封后可置4℃長期保存。但應注意保存溫度較低時本分離液易
出現白色結晶，影響分離效果。

細胞培養試劑人或各種動物外周血及臟器組織中性粒細胞分離液訂購說明：

1、絕大部分產品備有現貨，一般情況下都能訂貨當日發貨。 
2、部分非常用產品，需提前1－2日預訂，海外期貨則需要提前3-6周預訂。 
3、部分產品價格會因貨期、批次等因素發生變化，若有變動以訂貨當日新價格為準。 
4、每日訂單截止時間為16點整，部分城市可到17點整，因超過截止時間造成當日不能發貨的將于次日安排發貨。
5、請辦理完貨款后，將收據、底單等連同收貨人的地址、姓名、等以傳真、、短信、等形式通知我們。

運輸說明：

1、極低溫產品：極低溫產品運輸過程中加裝干冰運輸。用干冰把產品包裹起來，再用泡沫盒密封，膠帶層層粘住泡沫盒，放入索萊寶的箱子，然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產品的性質穩定如一，為您的實驗保駕護航。
2、低溫產品：低溫產品運輸過程中加裝索萊寶冰袋運輸。事先用冰袋把產品包裹起來，再使用泡沫盒密封，用膠帶嚴實密封泡沫盒，再放入索萊寶的箱子（保溫效果少可以持續一周），然后交付給合作快遞，安全快速高效放心的送客戶的手中，保證產品的性質穩定如一，為您的實驗保駕護航。
3、常溫產品：常溫產品運輸過程中無需加冰或者特殊包裝。產品由公司庫房人員快速配貨，準確快速高效的快遞保證產品快速送達您的手中。