雞免疫球蛋白M試劑盒
雞免疫球蛋白M試劑盒——依托復旦大學,集研發、銷售、實驗室技術服務的產品涉及分子生物學、細胞生物學、細菌學、遺傳學、免疫學、生物化學、蛋白質學、細胞治療、臨床應用等領域。
類別簡介:"專業經營進口胎牛血清、細胞因子、ELISA試劑盒、細胞、抗體、生物試劑、耗材、培養基、一抗、二抗、其產品吸附均勻,吸附性好,空白值低,孔底透明度高, 代做ELISA實驗等。"
供應商 :乾思生物
貨期 :7-10天
◇ 液體類標本:標本必須為液體,不含沉淀。包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清、組織勻漿等。1ml的全血可得到0.5ml的血清或血漿。每個標本量收集體積=100ul×檢測種類。
◇ 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。收集上清。如有沉淀形成,應再次離心。
◇ 血漿:應根據試劑盒的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,加入10%(v/v)抗凝劑(0.1M檸檬酸鈉或1% heparin 或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。如有沉淀形成,應再次離心。
◇ 尿液、胸腹水、腦脊液:用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。如有沉淀形成,應再次離心。
◇ 細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
◇ 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,緩沖液中可加入1μg/L蛋白酶抑制劑或50U/ml的Aprotinin(抑肽酶)。用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清置于-20度或- 70度保存,如有必要,可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
1. 試劑準備:所有試劑都必須在使用前達到室溫,使用后請立即按照說明書要求保存試劑。 實驗操作中請使用一次性的吸頭,避免交叉污染。
2. 加樣:加樣或加試劑時,請注意在吸取標本 / 標準品,酶結合物或底物時,前一個孔與后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大,將會導致不同的 “預孵育"時間,從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間(包括標準品及所有樣品)好控制在10分鐘內,如標本數量多,推薦使用多道移液器加樣。
3. 孵育:為防止樣品蒸發,試驗時將反應板放于鋪有濕布的密閉盒內,酶標板加上蓋或覆膜,以避免液體蒸發;洗板后應盡快進行下步操作,任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態;同時應嚴格遵守給定的孵育時間和溫度。
4. 洗滌:洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上充分拍干,勿將濾紙直接放入反應孔中吸水,同時要消除板底殘留的液體和手指印,避免影響后的酶標儀讀數。
5. 試劑配制:Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理,以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據所需的量配置使用,并使用相應的稀釋液配制,不能混淆。請確配置標準品及工作液,盡量不要微量配置(如吸取檢測溶液A時,一次不要小于10μl),以避免由于不準確稀釋而造成的濃度誤差;請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液或檢測溶液B工作液。
6. 反應時間的控制:加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化(比如,每隔10分鐘),如顏色較深,請提前加入終止液終止反應,避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數。
7. 底物:底物請避光保存,在儲存和溫育時避免強光直接照射。建議檢測樣品時均設雙孔測定,以保證檢測結果的準確性。如標本中待測物質含量過高,請先稀釋后再測定,計算時請后乘以稀釋倍數。
◇ 注意事項:收集標本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定,對收集后當天進行檢測的標本,儲存在4℃備用,如有特殊原因需要周期收集標本,將標本及時分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。避免反復凍融,標本2-8℃可保存48小時,-20℃可保存1個月,-70度可保存6個月。
完整的ELISA試劑盒包含以下各組分: (1)已包被抗原或抗體的固相載體(免疫吸附劑); (2)酶標記的抗原或抗體(結合物); (3)酶的底物; (4)陰性對照品和陽性對照品(定性測定中),參考標準品和控制血清(定量測定中); (5)結合物及標本的稀釋液; (6)洗滌液,在板式ELISA中,常用的稀釋液為含0.05%吐溫20磷酸緩沖鹽水; (7)酶反應終止液,常用的HRP反應終止液為硫酸,其濃度按加量及比色液終體積而異,在板式ELISA中一般采用3mol/L。主要包括37000多種一抗,1689種二抗,61種標簽和標記物及42種試驗小包裝產品。
具體步驟如下:
1. 棄去培養液,用PBS(不含鈣,鎂離子)洗1-2次。
2. 加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,倒轉放于37度培養箱1-3分鐘預熱,然后又將培養瓶倒轉大約30秒后,在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓分散,輕敲幾下培養培養瓶,細胞隨即脫落下來。
3. 加入6-8ml*培養基,吸出,分到新的培養瓶中。一傳二。傳代后一半用我們的培養基,一半用你們的,以免細胞不適應而造成生長不好。
注:(1)各種試劑禁忌常年續加;
(2)同一品牌不同批號的試劑不能混用;
(3)續加試劑后要重新定標,標準液即開即用;
(4)不同廠家的試劑禁用同一標準液定標;
(5)質控必須用高、中、低值三個樣本每天隨患者標本測定;
(6) 抗凝劑的使用;
(7) 校準液的正確使用。如果細胞未長滿,用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內,嚴格無菌操作,打開細胞培養瓶,吸出培養液,僅留下10ml培養液在瓶內繼續培養。如果細胞已長滿,即可進行傳代培養.
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