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新型組織化學染色脫色法
閱讀:999 發布時間:2020-9-30
本文摘自和光純藥時報 Vol.87 No.4(2019年10月號),由麻布大學獸醫學部 解剖第二研究室 小澤秋沙執筆撰寫。
本法是一種可使臨床檢查或研究中應用廣泛的組織化學染色蘇木精-伊紅(HE)或Masson法(MT)染色的組織切片脫色,并可重新用于其他染色的方法。
迄今為止,每一種組織化學染色通常都需要使用至少一片組織切片,因此必須準備與組織化學染色方法相對應數量的組織切片。然而,由于制備組織切片時的技術熟練度以及組織樣品狀態、大小等原因,有時很難備齊多個適合評價的組織切片。另外,在評價同一細胞時一般使用連續切片的方法,然而即使獲得了合適的連續切片,想要觀察的組織結構和細胞內結構,也可能不同時存在于兩個相鄰的組織切片上。
在這種情況下,重復利用已有觀察特征的細胞或結構的組織切片就會十分有用。HE染色可獲取組織大致特征,因此是*染色的代表染色法之一,如果可以對HE染色后的目標結構的組織切片進行重新染色,便可以提高臨床檢查以及研究結果的準確性。
至今為止,組織切片脫色通常使用乙醇與鹽酸的混合溶液、含有草酸、高錳酸鉀的溶液。然而,這些脫色方法都會影響組織切片在脫色后的再染色效果。
實際上,在乙醇中加入鹽酸的溶液不能對蘇木精等染料充分脫色。而通過高錳酸鉀、草酸脫色則會對組織切片造成很大的損害,重新染色時組織結構可能會因為切片剝離被破壞,從而限定了再染色的方法,也限制了組織切片的再利用。因此,學界期待開發一種幾乎不會損害組織切片,并且可以對多種染色法進行脫色后再染色的全新方法。
這次,FUJIFILM Wako開發的deColorizing Solution,可以對HE染色后確認了組織狀態(特定的結構及細胞的存在)的切片脫色,再重新用于其他染色,從而能夠從同一組織切片中獲得更多信息。該方法的特點在于可以對原本難以脫色的蘇木精、鐵蘇木精進行脫色。
使用方法:首先將染色后密封的載玻片標本浸入二甲苯等有機溶劑中,直至蓋玻片自然剝落。請注意,在此過程中若是強行分離蓋玻片可能會破壞組織切片。
另外,若在組織切片上仍然殘留有封固劑的狀態下就進行下一步驟,水溶性色素在水合后不會脫落,會降低隨后使用deColorizing Solution進行脫色的效果,因此必須使用二甲苯等有機溶劑充分浸泡。必須注意的是,標本越舊,封固劑的固化越牢固,封固劑就越難去除。
其次,將組織切片依次用各種濃度的乙醇進行水合,后浸入蒸餾水中。在水合過程中,伊紅等水溶性色素基本脫色,組織切片上僅殘留染色的蘇木精。將殘留蘇木精染色的組織切片浸入按照使用濃度稀釋的deColorizing Solution 1中。脫色主要取決于組織切片染色后保存的時長,但蘇木精在室溫下于deColorizing Solution 1中浸漬1 h基本就能脫色。
鐵蘇木精脫色時需要在deColorizing Solution 1中浸漬1 h后使用蒸餾水清洗3次,然后浸漬于deColorizing Solution 2。通過光學顯微鏡確認脫色程度(染色殘留情況),確認不會影響下次染色后,浸漬于蒸餾水并清洗3次,這時可用于重新染色。
目前,在使用deColorizing Solution脫色后,可以使用的再染色方法已確認的有HE染色、PAS染色、MT染色和免疫組織化學染色。
圖1和圖2分別是小鼠海馬體以及肝臟在HE染色后使用deColorizing Solution按照上述步驟脫色后的圖片。如圖1A及圖2A所見,包括細胞核在內,被蘇木精染色的部分在圖1B及圖2B中大部分已被脫色。
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圖1. 使用deColorizing Solution 1脫色HE 染色后的組織切片并重新染色
A:HE染色的小鼠海馬體組織圖像
B:使用deColorizing Solution 1脫色后與A相同位置的組織圖像
C:脫色后使用抗Iba1抗體進行熒光免疫組織化學染色后與A和B相同位置的組織圖像
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圖2. 使用deColorizing Solution 1脫色HE 染色后的組織切片并重新染色
A:HE染色的小鼠肝臟組織圖像
B:使用deColorizing Solution 1脫色后與A相同位置的組織圖像
C:脫色后使用抗PCNA抗體進行免疫組織化學染色后與A和B相同位置的組織圖像
另外,圖3為小鼠肝臟以及腎臟在MT染色后使用deColorizing Solution 1和2脫色后的圖像。圖3A和C中包括細胞核在內,被鐵蘇木精染色的大部分在圖3B和D中均已*脫色。
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圖3. 使用deColorizing Solution 1和2對MT 染色后的組織切片脫色
A:MT染色后的小鼠肝臟組織圖像
B:使用deColorizing Solution 1和2脫色后與A相同位置的組織圖像
C:MT染色后的小鼠腎臟的組織圖像
D:使用deColorizing Solution 1和2脫色后與C相同位置的組織圖像
圖1C為小鼠海馬體脫色后使用抗Iba1抗體(FUJIFILM Wako Pure Chemical Corporation)進行免疫組織化學染色的圖片,圖1A和B為同一位置的圖像。如圖可見,脫色后的海馬體切片仍然可以檢測出Iba1陽性小膠質細胞突起。圖2C為小鼠肝臟脫色后使用抗PCNA抗體進行免疫組織化學染色的圖片。如圖可見,陽性PCNA主要在肝細胞的細胞核中表達。
另外,并未發現因脫色導致的組織切片破壞等損傷。
該方法的優點在于,大量長期保存在大學、研究所、醫院等的*組織切片,在制備時沒有新型染色方法以及針對新型抗原的抗體,通過再染色等方法可以重新評價以獲取新的實驗信息。
目前,deColorizing Solution的應用只適用于HE 染色和MT 染色后的脫色,但隨著該方法的應用范圍拓展,脫色法在重復使用組織切片方面的實用性將進一步提高。
◆產品列表
產品編號 | 產品名稱 | 規格 | 包裝 |
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043-34561 | deColorizing Solution 1 | 病理研究用 | 250 mL |
046-34551 | deColorizing Solution 2 | 病理研究用 | 250 mL |
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