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技術文章

皮膚致敏試驗ADRA法:適用于混合物檢測 ——已收錄于OECD測試準則

閱讀:377          發布時間:2022-9-27

 


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  皮膚致敏試驗替代法ADRA無需使用實驗動物,即可檢測化學物質對皮膚是否會造成過敏反應

  現適用范圍得到擴大,其檢測混合物的方法已收錄于OECD測試準則用于評估化妝品、洗滌劑或消毒劑等各領域產品中使用的天然提取物的安全性

 

富士膠片株式會社(總部:東京都港區,總裁兼董事?CEO:后藤禎一)非常高興地通知廣大客戶,無需使用實驗動物,即可檢測化學物質對皮膚有無過敏反應的皮膚致敏試驗ADRA(Amino acid Derivative Reactivity Assay)已作為混合物※1皮膚致敏試驗方法收錄于OECD(經濟合作與發展組織)測試準則2。此次收錄,“ADRA“可評測物質(被測物質)不再是單一物質能檢測混合物,并且有效性驗證測試中也確認了*的再現性。作為國際上可靠的檢測方法被OECD認可,對普及"ADRA "法產生了重要推動力。


皮膚致敏測試是為了調查皮膚與化學物質接觸時,引發的過敏反應誘導的炎癥(皮疹)發生的皮膚致敏性。該測試用于產品規劃和生產前,評估新開發的化學物質和使用化合物的安全性。近年來,因人們健康意識的提高,開始廣泛運用天然提取物開發化妝品和洗滌劑等產品,所以需要可評估混合物皮膚致敏性的測試方法。“ADRA”在皮膚致敏性發生過程※3之一的“化學物質和蛋白的結合”,作為混合物測試方法收錄于OECD測試準則,可滿足上述需求。


FUJIFILM運用化學合成和分子設計的經驗生產的高靈敏度反應試劑,于2017年開發了高精度的可評估化學物質皮膚致敏性的皮膚致敏試驗“ADRA”。2019年,“ADRA”作為檢測單一物質的皮膚致敏性測試法收錄于OECD測試準則。之后,FUJIFILM在不斷改良“ADRA”測試法的同時,還致力于開發針對混合物的皮膚致敏試驗。


FUJIFILM通過更改常規“ADRA”的檢測方法實現了混合物的皮膚致敏性評估。具體變更有以下兩項,①反應試劑與被測樣品混合時,被測樣品制備的方法從以往的摩爾濃度※4變更為質量濃度※5②除了吸光檢測儀※6以外,還使用熒光檢測儀※7作為檢測反應進行的分析儀器,根據不同的樣品使用不同的檢測儀器可高精度檢測多種混合物的皮膚致敏性。


此外,在同一實驗室和不同實驗室間進行的再現性測試※8結果顯示,實現了*再現性。以此作為有效性驗證測試,收錄于OECD


現在,FUJIFILM為普及開發的”ADRA”法,由富士膠片和光純藥公司推出了能簡單操作的“ADRA試劑盒”(2018年9月發售),以及使用相同試劑盒評估皮膚致敏性的委托服務(2022年4月開始)。未來,針對天然提取物的皮膚致敏試驗,如化妝品、洗滌劑和消毒劑中使用的植物提取物等混合物,FUJIFILM將積極向化妝品公司、化工產品廠家和檢驗委托機構推廣“ADRA”,以進一步普及該測試法。


“確保產品和化學物質的安全”是FUJIFILM 2030年度目標CSR計劃“可持續發展的價值計劃 2030”的一項重要課題。今后,我們將繼續通過開發化學物質安的全性評估技術,為降低化學物質對環境和健康的危害作出貢獻。


  ※1 由多種成分組成的化學物質。

  ※2 OECD是以國際標準化評估化學物質特性和安全性的測試方法為目的的準則。

  ※3 引起皮膚致敏的過程有三種,分別為“化學物質與蛋白的結合”,“皮膚細胞響應”,“樹狀細胞響應”。

  ※4 溶液濃度的表示方法之一。目標物質溶解在1 L溶液中的物質的量。

  ※5 溶液濃度的表示方法之一。目標物質溶解在1 L溶液中的重量。

  ※6 通過紫外線的照射,檢測吸收190 nm~900 nm波長的光的物質以及該物質吸光度的儀器。

  ※7 通過照射特定波長的光,檢測發出220nm~900nm波長的光的物質以及該物質熒光強度的儀器。

  ※8 實驗室內再現性測試是驗證在同一實驗室中更改測試條件(測試時間,測試人員等)進行相同的測試,驗證能否獲得相同測試結果的測

     試。實驗室間再現性測試是指在多個不同的實驗室使用相同的測試條件,驗證能否獲得相同測試結果的測試。



 

 

◆皮膚致敏試驗替代法ADRA


以往的ADRA使用方法


● 使用FUJIFILM開發的高靈敏度檢測反應試劑(以下,ADRA試劑)進行的代替性皮膚致敏試驗。無需使用實驗動物,即可評估化學物質對皮膚有無過

   敏反應。ADRA試劑含有萘環的氨基酸衍生物的分子結構,因此可通過紫外光高靈敏度檢測。

● 評估單一物質的皮膚致敏性時,制備ADRA試劑和被測樣品摩爾濃度比恒定的反應溶液,使用高效液相色譜儀(HPLC)的吸收檢測器檢測未與被測樣

   品結合的ADRA試劑的量。由于可高靈敏度檢測,與傳統方法“直接多肽反應試驗(DPRA)”※9相比,可檢測約1/100量的被測樣品。

 


 

為使用ADRA法評估混合物的皮膚致敏性而對常規檢測方法作出的改變


 變更質量濃度

  由于天然提取物的成分往往不明,無法計算被測物質的摩爾濃度,所以FUJIFILM尋找合適的質量濃度(0.5mg/mL),變更被測樣品的制備方法為

  質量濃度。

② 有效運用熒光檢測儀

  以往使用的吸收檢測儀,可能會無法正確檢測和定量沒有與樣品結合的ADRA試劑的量,因此在使用ADRA試劑時,可有效運用HPLC的熒光檢測儀

  檢測會發出熒光的萘環。若使用光度檢測儀無法正確檢測和定量的被測物質,可在使用吸收檢測儀的基礎上使用熒光檢測儀。


  上述兩點的變更,可檢測混合物以及無法與被測樣品結合的ADRA試劑量。


  為驗證檢測方法變更所獲得的測試結果的有效性,于2019年10月~2020年12月進行了再現性測試。在五個實驗室中對10種化合物各進行了三次評估,調查在同一實驗室和不同實驗室之間是否可以獲得相同的測試結果,結果證明為*的再現性。


  ※9 肽與化學物質反應后,通過HPLC檢測結合的殘留肽來評估皮膚致敏性的方法。


 

 

 

◆相關產品


  ADRA試劑盒




 

 

 

 

 

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