質譜級賴氨酰肽鏈內切酶
本產品是質譜分析前處理時常用的蛋白分解酶即賴氨酰肽鏈內切酶，該酶可以特異性切除賴氨酸基團C末端的多肽，可用于蛋白測序分析和Lys-X化合物的酶合成。若同時使用賴氨酰肽鏈內切酶和胰酶，可更好地切斷賴氨酸 基團的多肽，增加多肽的數量。產品已按照使用習慣做成小包裝，是方便使用的冷凍干燥品。

質譜級賴氨酰肽鏈內切酶

 

　　本產品是質譜分析前處理時常用的蛋白分解酶即賴氨酰肽鏈內切酶，該酶可以特異性切除賴氨酸基團C末端的多肽，可用于蛋白測序分析和Lys-X化合物的酶合成。若同時使用賴氨酰肽鏈內切酶和胰酶，可更好地切斷賴氨酸 基團的多肽，增加多肽的數量。產品已按照使用習慣做成小包裝，是方便使用的冷凍干燥品。

 

來源：細菌

外觀：凍干粉（包含2 mmol/L Tris-HCl緩沖液，pH8）

活性：0.03～0.07 AU/vial

分子量：27,000(瓊脂糖過濾)，30,000（SDS-PAGE）

溶解性：溶于水或緩沖液

穩定性：溶解于pH值5.0-12.0的Tris緩沖液中，可在4℃穩定保存2年；在pH值6.0-11.0 30℃時能穩定保存，但溫度超過50℃時不穩定。

適pH值：9.0~9.5

等電點：6.9~7.0 

底物特異性：

可水解底物——Tos-Lys-OMe,Bz-Lys-NH₂,Bz-Lys-pNA,Lys-pNA

不可水解底物——Bz-Arg-NH₂,Bz-Arg-pNA,Arg-pNA

抑制劑：DFP，PMSF，TLCK

 

◆特點

● 高特異性、高蛋白質消化率、適用于蛋白質譜分析

● 提高裂解效率、增加肽段數量

● 根據使用量特意制備小包裝，方便使用

 

◆應用

 

　　分別采用胰蛋白酶(Tp)、賴氨酰肽鏈內切酶 (Lys-C) 和Tp與Lys-C聯用進行膠內酶切的效果比較。

　　牛血清蛋白BSA 的條帶(100ng) 通過SDS-PAGE 獲得，然后分別用Tp、Lys-C和Lys-C+Tp進行酶切，再用MALDI-TOFMS法進行分析。

　　這些蛋白酶的實驗效果見下表。

 

表 1：Tp、Lys-C和Lys-C+Tp的結果對照

這些結果表明Lys-C酶解的錯誤裂解率低。Tp酶解時加入Lys-C后，錯誤裂解率有所降低，同時，可以鑒定出更多的多肽。

 

	Tp	Lys-C	Lys-C+Tp
裂解位點	精氨酸和賴氨酸的C端	賴氨酸的C端	精氨酸和賴氨酸的C端
錯誤裂解率 (  錯誤裂解所占比例  )	多(8%)	很少(0%)	少(3%)
鑒定出的多肽數量	17	19	22

 

 

胰蛋白酶 (Tp)( 圖 a) 和賴氨酰肽鏈內切酶 (Lys-C)+Tp ( 圖 b) 酶切后的質譜結果對照圖。

Lys-C+Tp酶切后，可以在m/z=2000時得到吸收峰，而單獨的Tp酶切在m/z=2000時沒有吸收峰。該結果表明Lys-C可以提高測序覆蓋度。

( 數據由大阪醫療中心和婦嬰健康研究所Y. Wada博士提供 )

 

賴氨酰肽鏈內切酶

　　

賴氨酰肽鏈內切酶，初由Masaki 等人從土壤細菌中分離得到。該酶可以特異性剪切賴氨酸殘基C 末端和S-氨乙基半胱氨酸殘基的肽鍵，用于蛋白測序和Lys-X 化合物的酶催化合成。該酶穩定性高，在4M 尿素或0.1%SDS 溶液中30℃孵育6小時之后，仍然擁有完整的生物活性。

 

外觀	凍干粉（包含ca. 10% Tris-HCl buffer，pH 8）	活性	見包裝
分子量	27,000（凝膠過濾）；30,000 (SDS-PAGE)	溶解性	易溶于水或緩沖液
pH	9.0-9.5（酰胺酶的活性pH）	等電點	6.9-7.0
抑制劑	DFP、PMSF、TLCK	來源	細菌
穩定性	溶于pH 值5.0-12.0 的緩沖液中，可于4℃穩定保存。溶于pH值6.0-11.0的緩沖液中，可于30℃穩 　定保存，但是50℃及以上不穩定。
單位定義	一單位酰胺酶(AU) 指在30℃ pH 9.5 時每分鐘產生1 μmol對硝基苯胺所需的酶量。
底物特異性	水解底物：Tos-Lys-Ome、Bz-Lys-NH2、Bz-Lys-pNA、Lys-pNA
	非水解底物：Bz-Arg-NH2、Bz-Arg-pNa、Arg-pNA

 

產品編號	產品名稱	產品規格	產品等級
125-05061	賴氨酰肽鏈內切酶，MS級	20 μg×5	質譜級

 

質譜級賴氨酰肽鏈內切酶