Iba1（Ionized calcium-binding adapter molecule1）是分子量約為17 kDa的鈣結合蛋白。由于在中樞神經系統中，Iba1在小膠質細胞中特異性表達，因此被用作小膠質細胞標志物。據報告稱，Iba1在靜息型小膠質細胞和活化型小膠質細胞中均有表達，但有報告稱在活化型小膠質細胞中其表達會有所增加。

Iba1抗體，兔源（免疫組化用）

Anti Iba1, Rabbit (for Immunocytochemistry)

Iba1（Ionized calcium-binding adapter molecule 1）是分子量約為17 kDa的鈣結合蛋白。由于在中樞神經系統中，Iba1在小膠質細胞中特異性表達^1），因此被用作小膠質細胞標志物。據報告稱，Iba1在靜息型小膠質細胞和活化型小膠質細胞中均有表達，但有報告稱在活化型小膠質細胞中其表達會有所增加^2）。另外，Iba1也會在外周組織的巨噬細胞中表達，被稱為AIF-1（同種異體移植物炎癥因子1，Allograft inflammatory factor-1）。Iba1在細胞內與F-肌動蛋白結合，發揮著形成肌動蛋白纖維束的作用。這種肌動蛋白纖維束的形成被認為是細胞遷移和吞噬過程中觀察細胞膜波動結構形成所必須的^3）。

抗Iba1，兔源（免疫組化用）在免疫組織染色中可以對小膠質細胞包括突起一并進行染色，因此被世界各地的研究人員作為小膠質細胞標記抗體的標準來使用。

近年來，小膠質細胞因其神經營養和保護作用以及通過產生NO、TNF-α和IL-1β引起的神經損傷作用備受關注。

小膠質細胞的染色圖像

Anti Iba1，兔源（免疫組化用）

◆特點

● 在免疫組織染色（冰凍切片）中可染色小膠質細胞包括其突起^※

● 使用濃度為1︰500 - 1︰1,000，少量使用也可染色。

※ 染色程度取決于樣品狀況，無法保證一定能染色成功。

◆抗體信息

※ 擁有犬^4）、貓^5）、豬^6）、狨猴^7）、斑馬魚^8）的應用實例

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◆應用數據

免疫組織染色（小鼠）

免疫組織染色（大鼠）

◆Anti Iba1抗體系列

◆Anti Iba1產品列表

相關資料

◆原代小膠質細胞ICC實驗方案示例

將從新生大鼠（出生0~2天）的大腦中制備和培養的原代混合膠質細胞按照1.0×105 cell/well接種至4 well-plate、13 φmm蓋玻片（PLL涂層）。

↓

固定：4% formaldehyde-PBS, 15 min

↓

清洗：PBS

↓

通透：0.1% TX-100 PBS, 5 min

↓

封閉：3% BSA-3% normal goat serum-PBS (blocking buffer), >15min

↓

一抗反應：抗Iba1抗體（1:1,000）blocking buffer, 1h

↓

清洗

↓

二抗反應：Alexa Fluor 488標記抗兔IgG抗體/blocking buffer, 1h

↓

封片

↓

在熒光顯微鏡下進行觀察

FAQ

◆關于抗體

Q1：抗原是什么樣的？

A1：是Iba1的合成肽（C端序列相同）。具體序列未公開。

Q2：50 μg的使用量是多少？

A2：在免疫組織染色中，每張玻片使用200 μL抗體溶液（稀釋度為 1:1,000）的情況下，可使用約500次。

◆關于實驗方案

Q3：建議使用哪種二抗？

A3：FUJIFILM Wako擁有以下二抗的使用實例，可供參考。

Alexa Fluor^® 488-AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG (H+L) （Jackson ImmunoResearch公司, 廠家編號: 111-545-144）

Alexa Fluor^® 647-conjugated AffiniPure Donkey anti-Rabbit IgG (H+L)　(Jackson ImmunoResearch公司, 廠家編號: 711-605-152)

◆關于故障排除

Q4：WB中無法檢測出條帶

A4：本抗體適用于免疫組織染色（冰凍切片）以及免疫細胞染色，如需進行WB，請使用 抗Iba1,兔源（Western Blotting用) （產品編號：016-20001）

Q5：免疫組織染色和免疫細胞染色中小膠質細胞無法染色

A5：可能導致此問題的原因有以下幾種，請嘗試對應的解決方案。

1. 固定不充分

有報告稱，未灌注固定或固定不充分的樣品染色效果會降低。請在免疫組織染色中使用4%多-聚甲醛（PFA）進行灌注固定后再制備冰凍切片。

2. 抗原變性

請嘗試在以下條件下進行抗原修復操作

（A）檸檬酸緩沖液（pH 6.0）, 90℃, 9 min

（B）TE緩沖液（pH 9.0）, 90℃, 9 min

3. 樣品變質

需要重新制備樣品，切片厚度約為20-50 μm。

4. 抗體量少

請提高抗體濃度，推薦濃度為1︰500~1,000。

Q6：免疫組織染色和免疫細胞染色的背景過高。

A6：導致此問題的可能原因有以下幾種，請嘗試對應的解決方案。

① 封閉不充分

請嘗試延長封閉的孵育時間或更換封閉試劑。建議使用推薦Protocol中記載的1% BSA, 含0.3% TritonX-100的PBS和含1% BSA, 0.3% Tween-20的PBS，或3%二抗宿主的正常血清。

② 一抗的量過多

請降低一抗濃度，推薦濃度為1︰500~1,000。

③ 二抗的反應時間過長

請縮短反應時間。推薦反應時間為1~2 h，或增加二抗反應后的清洗次數。

④ 樣品變質

需要重新制備樣品，切片厚度約為20-50 μm。

⑤ 抗原變性

請嘗試在以下條件下進行抗原修復操作

（A）檸檬酸緩沖液（pH 6.0）, 90℃, 9 min

（B）TE緩沖液（pH 9.0）, 90℃, 9 min

⑥ 內源性的過氧化物酶發生反應（使用HRP或POD作為檢測酶時）

為了滅活內源性過氧化物酶，請在阻斷前使用含3%過氧化氫的80%甲醇溶液，并在-20℃條件下處理20 min。

Q7：在免疫組織染色中，除小膠質細胞外，神經細胞也被染色。

A7：可能導致此問題的原因有以下幾種，請嘗試對應的解決方案。

① 抗體的量過多

請降低一抗或二抗的抗體濃度，抗Iba1抗體的推薦濃度為1︰500~1,000。

② 二抗的反應時間過長

請縮短反應時間。推薦反應時間為1~2 h，或增加二抗反應后的清洗次數。

③ 抗原變性

請嘗試在以下條件下進行抗原修復操作

（A）檸檬酸緩沖液（pH 6.0）, 90℃, 9 min

（B）TE緩沖液（pH 9.0）, 90℃, 9 min

◆關于應用數據

Q8：本抗體可以用于流式細胞儀嗎？

A8：FUJIFILM Wako沒有使用實例，但以下論文中使用了本抗體，敬請參考。

Koh, H. S., et al.: Nat. Commun., 6(1),1(2015).
The HIF-1/glial TIM-3 axis controls inflammation-associated brain damage under hypoxia.

參考文獻