詳細介紹
重組雙堿性氨基酸內肽酶(RKex2)
◆概述
Kex-2(E.C.3.4.21.61)屬于枯草桿菌蛋白酶家族,為酵母自身編碼的一種前體加工酶,Ca2+ 依賴型絲氨酸蛋白酶,能夠專一性地識別和切割Lys-Arg,Arg-Arg,Pro-Arg等雙堿性氨基酸※ 的羧基端肽鍵。不同于Trypsin,該酶不能識別和切割單一堿性氨基酸(Arg或Lys)的羧基端肽鍵。常在酵母表達外源蛋白前體中加入Kex-2識別位點,便于外源蛋白前體加工。該酶適pH為9.0,在偏酸性環境中穩定,穩定pH為5.0-6.0。適溫度為37 ℃,酶活性不受常規絲氨酸蛋白酶抑制劑(如PMSF、TPCK等)抑制。
※堿性氨基酸:水解生成的氫氧根負離子多于氫正離子的氨基酸,其特點是側鏈常含有可質子化的堿性化學基團。包括以下三種:
中文名 | 英文名 | 縮寫 | 符號 | 等電點 |
精氨酸 | Arginine | Arg | R | 10.76 |
賴氨酸 | Lysine | Lys | K | 9.74 |
組氨酸 | Histidine | His | H | 7.59 |
◆優勢
● 單批次產量大,批間差小
● 高純度,高比活性
● 無外源性病毒污染,無動物源生產原料
◆純度
SDS-PAGE顯示純度>90%。
◆使用方法
溶解緩沖:20 mmol/L NaAc-HAc,2 mmol/L Ca2+,pH 5.0~5.5。
酶切體系:50~100 mmol/L Tris,2 mmol/L Ca2+,pH 7.0~9.0;或HEPES,5 mmol/L Ca2+,pH 7.0~9.0;
推薦使用量:蛋白酶:融合蛋白質量比1:20~1:1000
◆保存條件
儲存穩定性:凍干粉存于-15 ℃以下,24個月穩定;20 mmol/L NaAc-HAc,2 mmol/L Ca2+,
儲存穩定性:pH 5.0~5.5溶解后分裝儲存于-15 ℃以下,避免反復凍融;溶解后2~8 ℃保存建議不超過24 h。
運輸穩定性:冰袋保溫運輸,活性穩定。
◆應用實例
RKex-2特異性酶切合成短肽
合成多肽序列YGKRLWK,理論酶切位點酶切產物YGKR及LWK,蛋白酶:合成多肽質量比1:1000,37 ℃酶切反應10 min,LC-MS驗證酶切反應特異性。
Peak# | R.T. | M.W. | Sequence |
Peak 1 | 2.79 min | 522.6 | YGKR |
Peak 2 | 6.26 min | 445.56 | LWK |
Peak 3 | 6.94 min | 950.15 | YGKRLWK |
◆產品信息
產品編號 | 產品名稱 | 規格 | 比活 |
RKex20202 | RKex2 | 10 mg | 10 U/mg |
RKex20204 | RKex2 | 10 μg | 10 U/mg |
◆相關產品
產品編號 | 產品名稱 | 規格 | 儲存溫度 | 檢測范圍 |
MDRK0201 | 重組雙堿性內肽酶檢測試劑盒 | 96 孔 | 2~8 ℃ | 1.0~4000 ng/mL |