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目錄:上海一研生物科技有限公司>>生化檢測試劑盒>>氧化磷酸化系列>> 線粒體活性氧產(chǎn)生速率(ROS)測試盒

線粒體活性氧產(chǎn)生速率(ROS)測試盒
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100管/96樣

屬性

供貨周期:現(xiàn)貨 規(guī)格:100管/96樣 貨號:EY-01S151 應(yīng)用領(lǐng)域:生物產(chǎn)業(yè) 主要用途:僅用于科研

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100管/96樣600元30盒可售

更新時間:2024-11-21 20:56:37瀏覽次數(shù):826評價

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供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 100管/96樣
貨號 EY-01S151 應(yīng)用領(lǐng)域 生物產(chǎn)業(yè)
主要用途 僅用于科研
線粒體活性氧產(chǎn)生速率(ROS)測試盒(熒光法)活性氧(Reactive oxygen species, ROS)包括超氧自由基、過氧化氫、及其下游產(chǎn)物過氧化物和羥化物等,研究表明,機(jī)體95%以上的活性氧(ROS)都來自于線粒體,其失衡所致的氧化應(yīng)激與細(xì)胞生長增殖、發(fā)育分化、衰老和凋亡以及許多生理和病理過程有關(guān)。
正常情況下,細(xì)胞內(nèi)抗氧化防御系統(tǒng)與氧自由基處于平衡狀態(tài),細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)

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產(chǎn)品名稱

規(guī)格

貨號

線粒體活性氧產(chǎn)生速率(ROS)生化檢測試劑盒(熒光法)

100/96  

EY-01S151

 

10.png

測定意義:                         

活性氧(Reactive oxygen species, ROS)包括超氧自由基、過氧化氫、及其下游產(chǎn)物過氧化物和羥化物等,研究表明,機(jī)體95%以上的活性氧(ROS)都來自于線粒體,其失衡所致的氧化應(yīng)激與細(xì)胞生長增殖、發(fā)育分化、衰老和凋亡以及許多生理和病理過程有關(guān)。

正常情況下,細(xì)胞內(nèi)抗氧化防御系統(tǒng)與氧自由基處于平衡狀態(tài),細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)水平維持在較低的生理范圍;在病理情況下,細(xì)胞內(nèi)抗氧化系統(tǒng)與氧自由基的平衡被打破,細(xì)胞內(nèi)活性氧水平過多,就可破壞線粒體酶類、脂類和核酸,使機(jī)體出現(xiàn)氧化應(yīng)激,同時,活性氧還可攻擊線粒體DNA產(chǎn)生氧化損傷,導(dǎo)致線粒體ATP合成減少、線粒體膜電位破壞等結(jié)構(gòu)和功能變化。

因此,通過檢測活性氧的變化來判斷線粒體的功能是否正常具有重要意義。

測定原理:

熒光探針-還原型二氯熒光素 (2', 7'-dichlorodihy drofluorescin diacetate, DCFH-DA)可擴(kuò)散通過線粒體膜,在線粒體內(nèi)被酯酶水解,形成無熒光的DCFHDCFH迅速與ROS反應(yīng)生成熒光物氧化型二氯熒光素(2', 7'-dichlo rofluorescin, DCF) 根據(jù)上述原理設(shè)計了利用熒光法直接定量檢測線粒體ROS產(chǎn)生速率的方法。將熒光強(qiáng)度隨時間變化的數(shù)據(jù)點擬合,線性回歸直線斜率與ROS產(chǎn)生的速率呈正比。

需自備的儀器和用品:

多功能酶標(biāo)儀、恒溫培養(yǎng)箱、分析天平、可調(diào)式移液器、冰、蒸餾水。

 



11.png

試劑一:液體×1瓶,室溫保存。

試劑二:液體×1瓶,4℃保存。              

試劑三:粉劑×2瓶,-20℃保存。臨用前加入22mL試劑二,現(xiàn)配現(xiàn)用。

試劑四:液體×1支,4℃保存。

12.png

1、組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)進(jìn)行冰浴勻漿。16000g,4℃離心20min,取上清置冰上待測。

2、細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);16000g, 4℃離心20min,取上清液置冰上待測。

3、血清等液體:直接測定。

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蛋白激酶(A)熒光共振能量轉(zhuǎn)移法(FRET)、(B)化學(xué)發(fā)光法(luminometry)、

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MUG培養(yǎng)基  MUG-Mediumwith Kovacs  培養(yǎng)基20g+靛基質(zhì)20m  大腸埃希氏菌快速熒光測定

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瓊脂(不含亞碲酸)  250g  用于的選擇性分離培養(yǎng)

ER培養(yǎng)基  Eriksson Medium  10  BR

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大毛霉   細(xì)菌肥料  /

 

 

 

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(1)按照蛋白濃度計算

活性單位定義:25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位。

ADH (nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷(Cpr×V樣)÷T

=1608×△÷Cpr

(2)按照樣本質(zhì)量計算

活性單位定義:25℃中每克組織每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位。

ADH (nmol/min/g鮮重) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷(W×V樣÷V樣總)÷T

=1608×△A÷W

(3)按細(xì)胞數(shù)量計算

活性單位定義:25℃中每104個細(xì)胞每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位。

ADH (nmol/min/104cell) =(△A÷ε÷d×V反總×109)÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T

=1608×△A ÷細(xì)胞數(shù)量

(4)按液體體積計算

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