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產品名稱 | 貨號 | 規格 | 保存 | 價格(元) |
Lj 2 x fast pfu Master Mix | D1010L1185 | 1ml | -20℃ | 150 |
李記生物研發的Fast pfu酶較普通Pfu酶有更高的靈敏度和抗干擾能力，在獲得理想擴增效果的前提下，答復縮短了擴增時間，非常適合1-20kb的長片段擴增。本制品是將PCR反應所需的Fast pfu Taq酶、dNTPs 、MgCL2以及反應提沖液預先配制成2倍濃度的混合物。2 xFast Pfu Master Mix 專為擴增克隆DNA片段優化，高保真，錯誤率僅為1x 10-6，較普通Taq酶低100倍，較普通pfu酶低10倍。使用時只需加入模板和引物并稀釋到1倍濃度即可進行PCR反應，大大地簡化了操作過程，減少了PCR操作過程中的污染。
運輸與保存方法
冰袋運輸，收到貨后-20℃避光干燥保存，避免反復凍融，保存條件下1年有效。
使用方法
常用反應體系 | 常用PCR程序 | |||
2 x Lj fast pfu Master Mix上游引物 下游引物 模板
ddH2O | 25 μL 0.2-1.0μM(終濃度) 0.2-1.0μM(終濃度) 1-50ng（質粒） 10ng-1μg（基因組） 至50μL | 擴增片段<3k | 擴增片段≥3k | |
94℃ 90sec 94℃ 20s 30次循環 57-60℃ 20s 72℃ 1kb/30s 72℃ 5min 4℃ 保溫 | 94℃ 30次循環 72℃ 4℃ | 5min 94℃ 5s 68℃1kb/30s 5min 保溫 | ||
使用建議
Fast pfu DNA 聚合酶產生的PCR產物為平滑末端，無3’端“A”突出。PCR產物克隆方案有：
1） PCR前引物進行5’端加磷修飾或將PCR產物磷酸化處理后再直接克隆于平滑末端的載體中。
2） 將產物3’末端加A后再與T載體鏈接。
3） 由于Fast Pfu DNA聚合酶的校對活性可引起引物從3’端被部分降解。因此在設計引物時應適當增加引物的長度，理想的引物長度為20-30mers。另外為了減少有3’-5’外切酶活性引起的引物降解，盡量在冰上配制反應體系。
注意事項
1. 需溶解*后使用， 防止離子濃度不均勻。
2. 對高GC含量模板，建議將變性溫度提高到98℃。
3. 對于高GC模板，建議添加終濃度為5%-8%DMSO。
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