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和元李記(上海)生物技術...

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Taq DNA聚合酶(5u/uL) 使用說明書

閱讀:5438      發布時間:2017-11-14
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Taq DNA聚合酶(5U/μL)

產品名稱

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價格(元)

Taq DNA聚合酶(5U/μL)

D1010L1177

200 U

-20 ℃

80

 

產品描述

    本制品是94kDa的耐熱性DNA聚合酶,是把Thermus aquaticus DNA Polymerase基因在大腸桿菌中進行表達后經多次純化分離而得到的。它與天然Taq DNA聚合酶具有相同的功能。使用本制品擴增得到的PCR產物的3´端附有一個"A"堿基,因此可直接克隆于T載體中。配以Life-iLab*配方的5×反應緩沖液(已添加Mg2+)可獲得更加理想的擴增結果。

活性定義

    在74條件下,30分鐘內催化10nmol dNTP的摻入反應成為酸不溶性物質所需的酶量為一個單位。

產品特點

    :以DNA為模板,擴增長度可達8kb,可以擴增≤4kb片段。

    靈敏:可從0.05ng人基因組DNA模板中擴增出特定基因片段。

    高品質:*Real Time PCR的實驗要求。

*配方的5×Buffer:使PCR擴增反應更加穩定、靈敏、。

產品用途

    常規PCR鑒定;小片段目標基因克隆;平端PCR產物加A;雙脫氧法測序;熒光定量PCR

使用建議

    使用本試劑擴增得到的PCR產物3´ 端有一突出"A"堿基,可直接克隆于T載體中如需擴增克隆較長片段建議換用Pfu DNA聚合酶。當擴增大片段時,Taq酶的擴增效率大大低于Taq Plus酶,在>4Kb片段的PCR擴增中建議換用Taq Plus酶。

實用實例

1: 50μL擴增體系中,以5ngλDNA 為模板,對500bp~6.0kb

的擴增結果。

泳道M:1KB DNA Marker;

泳道1:0.5kb;泳道2:1.0kb;

泳道3:2.0kb;泳道4:3.0kb;

泳道5:4.0kb;泳道6:6.0kb;

 

2: 50μL擴增體系中,分別以50ng~0.05ng人基因組DNA為模

板,可對特定基因片段(380bp)進行很好的擴增。

泳道1:50ng;泳道2:5ng;

泳道3:0.5ng;泳道4:0.05ng;

泳道M:DNA Ladder 2000 Marker

產品包裝

 

組份

D1010L1177

D1010L1178

Taq DNA 聚合酶(5U/μL)

50μL

200μL

dNTPs混合液(各10mM)

200μL

1mL

5×Taq Buffer with Mg2+

2mL

10mL

 

運輸和儲存

    -20℃運輸保存,避免反復凍融,在保存條件下可保存1年。

質量保證

    經多次柱純化,SDS-PAGE檢測僅可見清晰單一的目的條帶;PCR方法檢測無大腸桿菌DNA殘留,無核酸內、外切酶污染。

 

常用反應體系

常用PCR程序

5 x Taq Buffer

上游引物

下游引物

dNTPs(個10mM)

模板

Taq DNA聚合酶

ddH2O

10μL

0.2-1.0μM(終濃度)

0.2-1.0μM(終濃度)

1μL

1-50ng(質粒)/10ng-1μg(基因組)

0.25μL(1.25U)

至50μL

擴增片段<3k

擴增片段≥3k

94℃            90s

          94℃ 20s

30次循環  57℃ 20s

           72℃ 60s/kb

72℃            5m

4℃             保溫

94℃          

30次循環                   

72℃

4℃        

      20s

94℃  5s

68℃  60s/kb

      5min

      保溫


注意事項使用方法

 

     1、2mM Mg2+的終濃度可以滿足絕大多數PCR擴增,對于某些PCR,為了保證較好的擴增,可調節為2-4mM。

     2、體系中加入推薦的酶量,可以滿足大多數PCR擴增,對于某些PCR,為了得到較好的擴增,可適當增加酶量。

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提供商

和元李記(上海)生物技術有限公司

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