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和元李記(上海)生物技術(shù)...

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CCK-8細(xì)胞增殖與毒性檢測試劑盒優(yōu)勢與使用方法

閱讀:635      發(fā)布時間:2024-1-26
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Cell Counting Kit-8 (CCK-8試劑盒),是一種基于WST-8(化學(xué)名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)而廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速、高靈敏度的比色檢測試劑盒。檢測原理為:WST-8在電子耦合劑1-Methoxy PMS存在的情況下,可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成橙黃色的水溶性的甲臜(formazan,參考圖1),生成的甲臜的顏色深淺與細(xì)胞增殖成正比,與細(xì)胞毒性成反比。使用酶標(biāo)儀在450nm 波長處測定OD 值,間接反映活細(xì)胞數(shù)量。本產(chǎn)品可用于細(xì)胞增殖測定,細(xì)胞毒性的檢測,藥物篩選,以及細(xì)胞生長抑制檢測等。

CCK-8法的優(yōu)勢

檢測方法MTT法XTT法WST-1法CCK-8法
產(chǎn)品性狀粉末2瓶溶液溶液1瓶溶液
使用方法配成溶液后使用現(xiàn)配現(xiàn)用即開即用即開即用
檢測靈敏度很高很高
檢測時間較長較短較短最短
檢測波長560-600nm420-480nm420-480nm430-490nm
細(xì)胞毒性高,細(xì)胞形態(tài)*消失很低,細(xì)胞形態(tài)不變很低,細(xì)胞形態(tài)不變很低,細(xì)胞形態(tài)不變
試劑穩(wěn)定性一般較差一般很好
批量樣品檢測可以非常適合非常適合非常適合
便捷程度一般便捷便捷非常便捷

運(yùn)輸與保存
藍(lán)冰運(yùn)輸。-20℃保存,有效期24個月。【注】:反復(fù)凍融會造成測定背景OD值升高。
使用方法

  1. 以96孔板為例,96孔板中每孔接種100 μL的細(xì)胞懸液,在細(xì)胞培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24 h。

  2. 向每孔加入10 μL不同濃度的待測物質(zhì)。如果僅測定細(xì)胞活性,則不需要2~3步驟,直接從第四步操作。

  3. 將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r間 (依據(jù)待測藥物而定)。

  4. 向每孔加入10 μL CCK-8溶液 (注意不要產(chǎn)生氣泡,輕輕混勻)。

  5. 將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育適當(dāng)時間(一般0.5~2 h)。

  6. 酶標(biāo)儀測定450 nm處的吸光值。

注意事項(xiàng)

  1. 本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用,不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。

  2. 建議調(diào)試合適的接種細(xì)胞的數(shù)量和加入CCK-8溶液后培養(yǎng)的時間。當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)96 孔板時,貼壁細(xì)胞至少1000 個/ 孔(100 μL 培養(yǎng)基),白細(xì)胞至少2500 個/ 孔(100 μL 培養(yǎng)基)。建議實(shí)驗(yàn)前設(shè)定幾個不同細(xì)胞數(shù)量的梯度孔進(jìn)行條件測試,細(xì)胞培養(yǎng)時間和處理方法根據(jù)實(shí)驗(yàn)情況而定,加入CCK-8溶液后(加入體積為每孔細(xì)胞培養(yǎng)液體積的10%),在37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育,不同時間點(diǎn)后測450 nm處的吸光值(CCK-8敏感性高,一些細(xì)胞0.5 h后就可以測定第一次)。

  3. CCK-8試劑盒的檢測依賴于脫氫酶催化反應(yīng),如果待檢測體系中有較多還原劑(或抗氧化劑)會造成背景OD值升高,干擾檢測結(jié)果。如果實(shí)驗(yàn)中有還原劑,請檢查背景的OD值,設(shè)法先去除還原劑干擾。例如,可在加入CCK-8溶液之前更換新鮮的培養(yǎng)基,以去除待測藥物的影響。當(dāng)待測藥物影響比較小時,可以不更換培養(yǎng)基,直接扣除培養(yǎng)基中加入待測藥物后的空白吸收即可。

  4. 進(jìn)行藥物抑制實(shí)驗(yàn)時,如果藥物中含有金屬,如Pb2+、Fe2+、Cu2+等金屬會對CCK-8 Solution的顯色反應(yīng)產(chǎn)生影響,從而導(dǎo)致檢測的靈敏度降低。

  5. 如果細(xì)胞培養(yǎng)時間較長,培養(yǎng)基顏色發(fā)生變化,應(yīng)洗滌細(xì)胞更換培養(yǎng)基后再加CCK-8檢測。細(xì)胞培養(yǎng)基酚紅不影響測定結(jié)果。

  6. 為使CCK-8試劑盒培養(yǎng)基充分混勻,減少CCK-8在移液器上的殘留,建議加樣前用培養(yǎng)基稀釋CCK-8試劑,混勻后加樣。

  7. 若暫時不測定OD值,可以向每孔中加入0.1 M 的HCL 溶液或者1% w/v SDS 溶液,室溫避光保存,24 h 內(nèi)檢測,吸光度不會受到影響。(加入1% SDS 溶液的體積與加入CCK-8溶液的體積相同)。

  8. 如果吸光值很低,可以適當(dāng)增加細(xì)胞數(shù)量或者延長加入CCK-8溶液后孵育的時間。

  9. 為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。


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