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和元李記(上海)生物技術(shù)...

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細(xì)胞凍存原理與方法(細(xì)胞凍存液選擇)

閱讀:545      發(fā)布時(shí)間:2024-5-6
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近年來,通過輸注免疫細(xì)胞或干細(xì)胞進(jìn)行相關(guān)疾病的治療取得良好療效,細(xì)胞治療技術(shù)展示出越來越廣闊的臨床應(yīng)用前景。通常細(xì)胞從采集到臨床應(yīng)用會(huì)間隔很長(zhǎng)時(shí)間,而新鮮細(xì)胞產(chǎn)品保存時(shí)限較短,為了延長(zhǎng)細(xì)胞保存時(shí)限或長(zhǎng)期保存細(xì)胞產(chǎn)品,需要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行冷凍后儲(chǔ)存。

細(xì)胞冷凍保存的原理

細(xì)胞凍存是通過冷凍保護(hù)機(jī)制將細(xì)胞放在低溫環(huán)境,減少細(xì)胞代謝,保持細(xì)胞活性,以便長(zhǎng)期儲(chǔ)存的一種技術(shù)。細(xì)胞復(fù)蘇后,蛋白質(zhì)仍有活性,細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能仍完好。

隨著溫度降低,細(xì)胞內(nèi)外的水分都會(huì)結(jié)晶,所形成的冰晶會(huì)造成細(xì)胞膜和細(xì)胞器的破壞,特別是0~-20℃的階段,冰晶呈針狀,極易引發(fā)細(xì)胞損傷。在不加任何保護(hù)劑條件下直接凍存細(xì)胞時(shí),細(xì)胞內(nèi)外環(huán)境中形成的冰晶,能導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)發(fā)生機(jī)械損傷、電解質(zhì)升高、滲透壓改變、脫水、pH改變、蛋白變性等,引起細(xì)胞死亡。

如果在細(xì)胞溶液中加入冷凍保護(hù)劑,可保護(hù)細(xì)胞免受溶質(zhì)損傷和冰晶損傷。冷凍保護(hù)劑容易同水分子結(jié)合,降低冰點(diǎn),在緩慢的凍結(jié)條件下,能使細(xì)胞內(nèi)水分在凍結(jié)形成冰晶前透出細(xì)胞,并且通過降低未結(jié)冰溶液中電解質(zhì)的濃度,使細(xì)胞免受溶質(zhì)損傷,細(xì)胞得以在超低溫(液氮)條件下保存。冷凍保護(hù)劑對(duì)細(xì)胞的冷凍保護(hù)效果還與冷凍速率、冷凍溫度和復(fù)溫速率有關(guān),且不同的冷凍保護(hù)劑其冷凍保護(hù)效果也不一樣。

細(xì)胞冷凍保護(hù)劑

細(xì)胞冷凍保護(hù)劑可以根據(jù)否穿透細(xì)胞膜分為滲透性和非滲透性兩種。滲透性冷凍保護(hù)劑可以透過細(xì)胞膜滲透到細(xì)胞內(nèi),多為小分子,包括二甲基亞砜(DMSO)、甘油、乙二醇、丙二醇、甲醇、乙醇等,這類保護(hù)劑能夠在細(xì)胞冷凍懸液凝固之前,穿過細(xì)胞膜滲透到細(xì)胞內(nèi),減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成,從而減少細(xì)胞損傷。DMSO是臨床級(jí)凍存保護(hù)劑中重要的成分,目前經(jīng)典的凍存保護(hù)劑中通常含有10%左右的DMSO。DMSO是常用的凍存保護(hù)劑和常用藥用輔料,在國(guó)家藥品監(jiān)督管理局藥品審評(píng)中心藥用輔料數(shù)據(jù)庫(kù)可以查詢到其詳細(xì)信息。非滲透性冷凍保護(hù)劑一般是一些大分子物質(zhì),不能滲透到細(xì)胞內(nèi),主要包括右旋糖苷、蔗糖、聚乙二醇、葡聚糖、白蛋白等,其可以優(yōu)先同溶液中的水分子相結(jié)合,使冰點(diǎn)降低,減少冰晶的形成。由于其分子量大,可以使溶液中電解質(zhì)濃度降低,從而減輕溶質(zhì)損傷,同時(shí)能降低溶液中低分子溶質(zhì)(電解質(zhì))濃度,減輕鹽損傷。

細(xì)胞冷凍保存的一般流程

細(xì)胞凍存過程要緩慢,復(fù)蘇則相反,應(yīng)快速升溫。慢凍的原因如上所述,為了避免降溫時(shí),細(xì)胞內(nèi)的水分還未來得及脫離細(xì)胞,但卻形成冰晶,對(duì)細(xì)胞造成損傷。(1)凍存前觀察細(xì)胞狀態(tài),測(cè)定細(xì)胞活率和計(jì)數(shù)。(2)將要凍存的細(xì)胞收集于離心管中,1200~1800rpm,離心5min,棄上清。(3)根據(jù)需要調(diào)整細(xì)胞凍存密度,緩慢加入適當(dāng)體積配制好預(yù)冷的凍存液或市售的無血清細(xì)胞凍存液,重懸細(xì)胞。(4)將細(xì)胞懸液分裝至凍存管中,旋緊管蓋,做好標(biāo)記。(5)將凍存管放入程序降溫盒(預(yù)冷)內(nèi),然后放至-80℃冰箱過夜,次日轉(zhuǎn)移至液氮罐中長(zhǎng)期保存。



如何選擇細(xì)胞凍存液

細(xì)胞凍存液的質(zhì)量和成分對(duì)細(xì)胞的凍存效果有很大的影響。如果細(xì)胞凍存液的成分不合適或質(zhì)量不達(dá)標(biāo),可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞凍存失敗或細(xì)胞復(fù)蘇后存活率低。

選擇細(xì)胞凍存液時(shí),應(yīng)考慮以下3個(gè)重要因素:

(1)細(xì)胞類型,不同的細(xì)胞類型對(duì)細(xì)胞凍存液的成分和濃度有不同的要求。

(2)凍存時(shí)間,細(xì)胞凍存的時(shí)間越長(zhǎng),對(duì)細(xì)胞凍存液的要求越高。

(3)復(fù)蘇率,細(xì)胞凍存液的質(zhì)量和成分對(duì)細(xì)胞的復(fù)蘇率有很大的影響。

下面給你介紹下李記生物~李記生物細(xì)胞凍存液的主要產(chǎn)品:

  • 藥輔級(jí)細(xì)胞凍存液(非程序降溫)

  • 快速細(xì)胞凍存液(GMP級(jí))

  • 無血清細(xì)胞凍存液(無DMSO)

  • 無血清細(xì)胞凍存液(增強(qiáng)型)

  • 快速細(xì)胞凍存液(無血清、無蛋白)

一、快速細(xì)胞凍存液(無血清、無蛋白)

產(chǎn)品描述

和元李記快速細(xì)胞凍存液(無血清、無蛋白)可適應(yīng)于絕大部分腫瘤細(xì)胞和常規(guī)細(xì)胞,大部分干細(xì)胞(和元李記已測(cè)試細(xì)胞種類請(qǐng)關(guān)注),凍存細(xì)胞可在 -80℃ 長(zhǎng)期保存(>6年)。不含動(dòng)物源性蛋白,不含血清成分,可有效減少各類細(xì)菌、病毒和支原體等污染,保證凍存細(xì)胞的安全。該凍存液含DMSO、葡萄糖等各種細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)成分,提高細(xì)胞存活率和活力,亦適合于無血清培養(yǎng)細(xì)胞和蛋白表達(dá)細(xì)胞。

產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)

  1. 無需程序性降溫,可直接將細(xì)胞放入凍存液置于-80℃冰箱(-80℃可保存>6年),凍存液無需稀釋。

  2. 凍存液不含血清,大大降低細(xì)胞污染可能性。

  3. 不要加血清,不要反復(fù)逐級(jí)降溫,不要液氮,綜合下來省時(shí)更省錢。

  4. 案列可于-資源支持查詢!

  5. 各細(xì)胞凍存數(shù)據(jù),可參考下方李記凍存液數(shù)據(jù)庫(kù)(數(shù)據(jù)由使用客戶反饋)

產(chǎn)品組分

產(chǎn)品名稱貨號(hào)規(guī)格
快速細(xì)胞凍存液(無血清、無蛋白)AC05L03230mL
快速細(xì)胞凍存液(無血清、無蛋白)AC05L033100mL

運(yùn)輸與保存

常溫運(yùn)輸。4℃保存,有效期24個(gè)月。

二、無血清細(xì)胞凍存液(無DMSO)

產(chǎn)品描述

李記生物無血清細(xì)胞凍存液(無DMSO)適用于多種細(xì)胞的冷凍保存,尤其適用于原代肝細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞等的凍存。

訂購(gòu)信息

產(chǎn)品名稱貨號(hào)規(guī)格
無血清細(xì)胞凍存液(無DMSO)AC05L164100mL

產(chǎn)品參數(shù)

pH值:25±2℃時(shí),7.2-7.8
細(xì)菌:陰性
真菌:陰性
支原體:陰性

運(yùn)輸與保存

藍(lán)冰運(yùn)輸。4℃密封保存,有效期12個(gè)月。

三、無血清細(xì)胞凍存液(增強(qiáng)型)

產(chǎn)品描述

李記生物無血清細(xì)胞凍存液(增強(qiáng)型)適用于常用動(dòng)物細(xì)胞系的冷凍保存,尤其適用于原代細(xì)胞、干細(xì)胞等的冷凍保存。

訂購(gòu)信息

產(chǎn)品名稱貨號(hào)規(guī)格
無血清細(xì)胞凍存液(增強(qiáng)型)AC05L053100mL

產(chǎn)品參數(shù)

外觀:淡黃色澄清溶液
pH值:25±2℃時(shí),7.2-7.8
細(xì)菌:陰性
真菌:陰性
支原體:陰性
內(nèi)毒素:<1 EU/mL

運(yùn)輸與保存

藍(lán)冰運(yùn)輸。4℃密封保存,有效期24個(gè)月。

四、快速細(xì)胞凍存液(GMP級(jí))

產(chǎn)品描述

和元李記快速細(xì)胞凍存液(GMP級(jí))不含動(dòng)物源性蛋白,不含血清成分,可有效減少各類細(xì)菌、病毒和支原體等污染,保證凍存細(xì)胞的安全。通用于各種動(dòng)物細(xì)胞株,尤其適用于各類原代細(xì)胞、干細(xì)胞及雜交瘤等蛋白表達(dá)細(xì)胞的凍存。

本產(chǎn)品含多種保護(hù)劑、穩(wěn)定劑組合,可顯著降低凍存過程中溶液冰點(diǎn),提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性,有效防止冰晶對(duì)細(xì)胞的損傷;同時(shí)降低冰凍時(shí)細(xì)胞周圍電解質(zhì)濃度,避免電解質(zhì)損傷;還可延緩凍存過程中細(xì)胞的互相擠壓,保護(hù)細(xì)胞膜。從而極大提高細(xì)胞復(fù)蘇率和活力。

產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)

  1. 便捷:即用型,無需程序性降溫,可直接將細(xì)胞放入凍存液置于-80℃冰箱,也可在后續(xù)轉(zhuǎn)移至液氮中進(jìn)行長(zhǎng)期保存。

  2. 高效:細(xì)胞存活率和復(fù)蘇活力高,普遍高于90% 。

  3. 安全:無血清,無動(dòng)物源成分,化學(xué)成分明確,大大降低細(xì)胞污染可能性。

  4. 質(zhì)優(yōu):嚴(yán)格的質(zhì)量控制,產(chǎn)品性能媲美進(jìn)口;所有原料均選自經(jīng)嚴(yán)格檢測(cè)的低內(nèi)毒素、高純藥用級(jí)別原料,采用低DMSO配方,注射用水配置符合GMP生產(chǎn)。

  5. 批間差異?。?/span>全程于GMP潔凈車間生產(chǎn)與包裝,并經(jīng)過嚴(yán)格的內(nèi)毒素、滲透壓、 PH、細(xì)菌病原體等質(zhì)量檢測(cè),確保產(chǎn)品質(zhì)量及批次間的一致性。

  6. 適用范圍廣:通用于各種動(dòng)物細(xì)胞株,尤其適用于各類原代細(xì)胞、干細(xì)胞及雜交瘤等蛋白表達(dá)細(xì)胞的凍存;已通過實(shí)驗(yàn)證明不不會(huì)影響干細(xì)胞表型和生長(zhǎng)狀態(tài),且可維持干細(xì)胞的多分化性。

  7. 案列可于-資源支持查詢!

產(chǎn)品組分

產(chǎn)品名稱貨號(hào)規(guī)格
快速細(xì)胞凍存液(GMP級(jí))AC05L043100mL

運(yùn)輸與保存

藍(lán)冰運(yùn)輸。4℃保存,有效期12個(gè)月。

五、藥輔級(jí)細(xì)胞凍存液(非程序降溫)

產(chǎn)品描述

藥輔級(jí)細(xì)胞凍存液(非程序降溫)是由李記生物自主研發(fā)的含有7.5% DMSO,無血清、無動(dòng)物成分的即用型細(xì)胞凍存液,在超低溫(-80℃~-196℃)環(huán)境下為細(xì)胞提供一個(gè)安全、有效的保護(hù)環(huán)境,凍存復(fù)蘇后細(xì)胞活率可達(dá)90%以上。

本產(chǎn)品含有甘氨酸,DMSO以及磷酸鹽緩沖液的水溶液,適用于間充質(zhì)干細(xì)胞的冷凍保存。

訂購(gòu)信息

產(chǎn)品名稱貨號(hào)規(guī)格
藥輔級(jí)細(xì)胞凍存液(非程序降溫)AC05L174100mL

產(chǎn)品參數(shù)

外觀:澄清透明溶液
裝量:應(yīng)不低于標(biāo)示裝量
pH值:7.0~7.6(25±2℃)
滲透壓:1650~2025 mOsmol/Kg
無菌:應(yīng)無菌生長(zhǎng)
支原體:應(yīng)符合規(guī)定
內(nèi)毒素:<0.25EU/mL

運(yùn)輸與保存

藍(lán)冰運(yùn)輸。4℃密封保存,有效期24個(gè)月。

本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用,不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。



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