BCA (Bicinchoninic acid) 法是目前應(yīng)用比較廣泛的蛋白質(zhì)濃度測定方法。基于雙縮脲反應(yīng),即在堿性環(huán)境下蛋白質(zhì)將Cu2+還原成Cu+,Cu+與BCA試劑形成紫顏色的絡(luò)合物,在562 nm處有高的吸光值,該反應(yīng)產(chǎn)物的量與蛋白質(zhì)濃度成正比。測定其在562 nm處的吸光值,并與標(biāo)準(zhǔn)曲線對比,即可計(jì)算待測蛋白的濃度。該方法快速靈敏、穩(wěn)定可靠且對不同種類蛋白質(zhì)變異系數(shù)很小。試劑盒中提供了濃度穩(wěn)定的蛋白標(biāo)準(zhǔn)品用于制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。
BCA 蛋白定量試劑盒可用于試管法檢測,也可用于微孔板法檢測。試管法需較大量蛋白樣品(100 μL)和工作液(2 mL),蛋白樣品與 BCA 工作液的比率為1:20(v/v),蛋白質(zhì)測定范圍為20-2000 μg/mL,采用加強(qiáng)法可以檢測到 5 μg/mL;微孔板法操作簡單方便,僅需少量(10-25 μL)的蛋白樣品和工作液(200 μL),蛋白樣品與工作液的比率為1:20(v/v)或者1:8(v/v),蛋白質(zhì)測定范圍為 20-2000 μg/mL,采用加強(qiáng)法可以檢測到 5 μg/mL。
BCA蛋白定量試劑盒價(jià)格是多少?
李記生物BCA蛋白定量試劑盒價(jià)格198元,規(guī)格500T!
BCA蛋白定量試劑盒使用方法
一、配制標(biāo)準(zhǔn)品和工作液
1. 配制 BSA 標(biāo)準(zhǔn)品體系(線性范圍20-2000 μg/mL或者5-250μg /mL標(biāo)準(zhǔn)品制備各2種配置方法,請根據(jù)習(xí)慣選用恰當(dāng)方式)。【注】:BSA 標(biāo)準(zhǔn)品濃度為2 mg/mL,稀釋液為蛋白樣品的溶解液,原則上蛋白樣品在什么溶液中,標(biāo)準(zhǔn)品也宜用什么溶液稀釋。但也可用水或 1 X PBS 進(jìn)行稀釋。
BSA 標(biāo)準(zhǔn)品體系配制表(配制后可放置于4℃ 冰箱多次使用)
表1.微孔板檢測BSA 標(biāo)準(zhǔn)品體系配制(線性范圍 20-2000 μg/mL)配置方法一
Vial | 稀釋液體積(μL) | BSA標(biāo)準(zhǔn)品體積(μL) | BSA終濃度(μg/mL) |
A | 0 | 100 | 2000 |
B | 25 | 75 | 1500 |
C | 50 | 50 | 1000 |
D | 83 | 50 | 750 |
E | 75 | 25 | 500 |
F | 140 | 20 | 250 |
G | 150 | 10 | 125 |
H | 158 | 2 | 25 |
I | 100 | 0 | 0=Blank |
表2.微孔板檢測BSA 標(biāo)準(zhǔn)品體系配制(線性范圍 20-2000 μg/mL)配置方法二
Vial | 稀釋液體積(μL) | BSA標(biāo)準(zhǔn)品體積(μL) | BSA終濃度(μg/mL) |
A | 0 | BSA 標(biāo)準(zhǔn)液100 | 2000 |
B | 25 | BSA 標(biāo)準(zhǔn)液75 | 1500 |
C | 65 | BSA 標(biāo)準(zhǔn)液65 | 1000 |
D | 35 | Vial B 35 | 750 |
E | 65 | Vial C 65 | 500 |
F | 65 | Vial E 65 | 250 |
G | 65 | Vial F 65 | 125 |
H | 80 | Vial G 20 | 25 |
I | 80 | 0 | 0=Blank |
表3.BSA標(biāo)準(zhǔn)品體系(微孔板檢測,線性范圍 5-250μg /mL)配置方法一
Vial | 稀釋液體積(μL) | BSA標(biāo)準(zhǔn)品體積(μL) | BSA終濃度(μg/mL) |
A | 70 | 10 | 250 |
B | 75 | 5 | 125 |
C | 78 | 2 | 50 |
D | 79 | 1 | 25 |
E | 399 | 1 | 5 |
F | 80 | 0 | 0 |
表4.BSA標(biāo)準(zhǔn)品體系(微孔板檢測,線性范圍 5-250μg /mL)配置方法二
Vial | 稀釋液體積(μL) | BSA標(biāo)準(zhǔn)品體積(μL) | BSA終濃度(μg/mL) |
A | 70 | BSA 標(biāo)準(zhǔn)液10 | 250 |
B | 40 | Vial A 40 | 125 |
C | 45 | Vial B 30 | 50 |
D | 40 | Vial C 40 | 25 |
E | 40 | Vial D 10 | 5 |
F | 40 | 0 | 0 |
2. 配制 BCA工作液
(1) 計(jì)算所需要的總BCA 工作液體積。總BCA工作液體積=(標(biāo)準(zhǔn)品數(shù)量+待測樣品數(shù)量)x重復(fù)數(shù)x每個(gè)樣品所需要的BCA 工作液。【注】:試管法檢測時(shí)每個(gè)樣品加 2.0 mL BCA 工作液,微孔板檢測每個(gè)樣品加200 μL BCA 工作液。
(2) 配制BCA工作液:50 體積的BCA 試劑 A 中加入1 體積的BCA 試劑B(A:B=50:1),充分混勻。【注】:BCA工作液裝入密封容器內(nèi),室溫條件24h 穩(wěn)定。
二、檢測方法
1. 試管檢測方法(樣品:BCA工作液=1:20)
(1) 各取100 μL 標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣品加入到反應(yīng)管中。
(2) 每管加入2.0 mL BCA 工作液,混勻。根據(jù)待測樣品的濃度范圍選擇孵育時(shí)間和溫度。
標(biāo)準(zhǔn)孵育方法:37℃ 孵育30 min 或者室溫2h(檢測范圍:20-2000 μg/mL)
增強(qiáng)孵育方法:60℃ 孵育30 min(檢測范圍:5-250 μg/mL)
【注】:BCA 檢測蛋白濃度,延長孵育時(shí)間會加深顏色反應(yīng)。升高溫度會加快顯色反應(yīng),但是溫度升高和時(shí)間延長會降低檢測下限,以及降低工作線性范圍。若蛋白濃度很低,可在較高溫度孵育或者適當(dāng)延長孵育時(shí)間。
(3) 冷卻到室溫。在分光光度計(jì)上進(jìn)行檢測,設(shè)定波長為 562 nm,在10 min內(nèi)對所有樣品讀數(shù)。【注】:由于BCA 反應(yīng)達(dá)不到真正的反應(yīng)終點(diǎn),即使溫度降低至室溫生色反應(yīng)液會繼續(xù)。但是,由于室溫下生色比率相當(dāng)?shù)停虼巳羰?0 min 內(nèi)能對所有的樣本進(jìn)行 562 nm 吸光度的測試,不會導(dǎo)致明顯錯(cuò)誤。
(4) 根據(jù)BSA 標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度(減去標(biāo)準(zhǔn)品中空白孔的OD 值即最終的讀數(shù)),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(X-蛋白濃度μg/mL;Y-最終的OD 562nm)。依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣品的稀釋倍數(shù)計(jì)算樣品蛋白濃度。
2. 微孔板檢測方法(樣品: BCA工作液=1:20)
(1) 各取10 μL標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣品加入到微孔板中。【注】:樣品與工作液比例為1:20,檢測范圍為125-2000 μg/mL。若樣品濃度非常低,可使用25μL 標(biāo)準(zhǔn)品和待檢測樣品進(jìn)行檢測(即1:8),這時(shí)試劑盒的檢測范圍為 20-2000 μg/mL。
(2) 每孔加入200 μL BCA 工作液,槍頭吹打充分混勻。蓋上微孔板,37℃ 孵育30 min。
(3) 冷卻到室溫,在酶標(biāo)儀上的562 nm 波長范圍處檢測吸光度。
(4) 根據(jù)BSA標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度(減去標(biāo)準(zhǔn)品中空白孔的OD值即最終的讀數(shù)),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線( X-蛋白濃度μg/mL;Y-最終的OD 562nm)。依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣品的稀釋倍數(shù)計(jì)算樣品蛋白濃度。
(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)
立即詢價(jià)
您提交后,專屬客服將第一時(shí)間為您服務(wù)