蛋白Marker即蛋白分子量標準,是幾種已知分子量的蛋白質的混合物,像“尺子"一樣用來指示蛋白質條帶的大小。在Western Blot實驗中,蛋白Marker主要是用來指示蛋白條帶所對應的分子量大小,此外,蛋白Marker還可以用來輔助判斷蛋白轉膜是否成功或蛋白在凝膠上的電泳進度等作用,所以選擇合適的蛋白Marker也是實驗成功的重要條件之一。
李記生物預染蛋白分子量標準
預染蛋白在不同的緩沖體系下有不同的表觀分子量,以上2個圖片為兩種緩沖體系下的電泳示意圖。適合作為 SDS-PAGE 和 Western Blot 的蛋白質分子量標準。可用于SDS-PAGE和Western Blot實驗中蛋白分子量大小的參照。
蛋白Marker的分類
• 未預染 Marker:非預染蛋白Marker在電泳過程中看不到,電泳結束后經過蛋白染色后才能起指示作用,無法在實驗過程中起預示作用。但是由于蛋白沒有附帶染料分子或者是標記分子,所示大小正好是蛋白原本的大小,所以最準確。
• 預染 Marker:含染料和蛋白,肉眼看見,可直接觀察電泳進程和轉膜是否完quan,較為常用。但 Marker 蛋白跟染料共價偶聯導致蛋白分子電泳的遷移效率發生改變,其指示的分子量不是精確值而有一定誤差。
• 曝光 Marker:在曝光步驟中,可將目的條帶和 Marker 條帶同時曝光顯示,減小誤差,并克服了預染 Marker 遷移率的改變,但價格昂貴。
蛋白Marker的選擇
• 范圍覆蓋
選擇蛋白 Marker 時,確保其分子量范圍能夠覆蓋所要研究的目標蛋白的大小。一般來說,選擇分子量較小、中等和較大的標準,以涵蓋不同大小的蛋白。
• 雙標記 Marker
有些 Marker 是雙標記的,可以在電泳過程中染色,這樣的 Marker 適用于雙色標記(例如熒光和化學發光)的應用,提供更多的實驗選擇。
• 質量和穩定性
選擇來自可靠供應商的高質量和穩定的蛋白 Marker,確保其性能的一致性和準確性。
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