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產(chǎn)品描述
　　細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測試劑盒(Cell Cycle and Apoptosis Analysis Kit)是一種采用經(jīng)典的碘化丙啶染色(Propidium staining，即 PI staining)方法進(jìn)行細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡分析的檢測試劑盒。
　　碘化丙啶(Propidium，簡稱 PI)是一種雙鏈 DNA 的熒光染料。碘化丙啶和雙鏈 DNA 結(jié)合后可以產(chǎn)生熒光，并且熒光強(qiáng)度和雙鏈 DNA 的含量成正比。細(xì)胞內(nèi)的 DNA 被碘化丙啶染色后，可以用流式細(xì)胞儀對細(xì)胞進(jìn)行 DNA 含量測定，然后根據(jù) DNA 含量的分布情況，可以進(jìn)行細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡分析。
　　碘化丙啶染色后，假設(shè) G0/G1 期細(xì)胞的熒光強(qiáng)度為 1， 那么含有雙份基因組 DNA 的 G2/M 期細(xì)胞的熒光強(qiáng)度的理論值為 2，正在進(jìn)行 DNA 復(fù)制的 S 期細(xì)胞的熒光強(qiáng)度為 1-2 之間。凋亡細(xì)胞由于細(xì)胞核發(fā)生濃縮以及發(fā)生 DNA fragmentation 導(dǎo)致部分基因組 DNA fragmentation 在染色過程中丟失，因此凋亡細(xì)胞碘化丙啶染色后呈現(xiàn)明顯的弱染，即熒光強(qiáng)度小于 1，在流式檢測的熒光圖上出現(xiàn)所謂的 sub-G1 峰，即凋亡細(xì)胞峰。
　　細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)，由于胞漿和染色質(zhì)濃縮、核碎裂， 產(chǎn)生凋亡小體，使細(xì)胞的光散射性質(zhì)發(fā)生變化。在細(xì)胞凋亡的早期，細(xì)胞對前向角光散射的能力顯著降低，對側(cè)向光散射的能力增加或沒有變化。在細(xì)胞凋亡的晚期，前向和側(cè)向光散射的信號(hào)均降低。因此可通過流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞光散射的變化觀察細(xì)胞凋亡情況。
　　本試劑盒通常應(yīng)用于培養(yǎng)的貼壁或懸浮細(xì)胞的細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測。如果用于組織的細(xì)胞周期與細(xì)胞凋亡檢測，則必須把組織消化成單細(xì)胞狀態(tài)，才可以進(jìn)行檢測。

訂購信息

產(chǎn)品組分

運(yùn)輸與保存
　　藍(lán)冰運(yùn)輸。-20℃保存；組分B需避光保存于-20℃。有效期24個(gè)月。

使用方法
1.細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備：
對于貼壁細(xì)胞：
（1）首先小心收集細(xì)胞培養(yǎng)液到離心管內(nèi)備用。
（2）用胰酶消化細(xì)胞，至細(xì)胞可以被輕輕用移液管或槍頭吹打下來時(shí)，加入前面收集的細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下所有的貼壁細(xì)胞，并輕輕吹散細(xì)胞。
（3）再次收集到離心管內(nèi)，用1000 g 左右離心 3-5 min，沉淀細(xì)胞。
注：對于特定的細(xì)胞，如果細(xì)胞沉淀不充分，可以適當(dāng)延長離心時(shí)間或稍稍加大離心力。
（4）小心吸除上清，可以殘留約 50 μL 左右的培養(yǎng)液，以避免吸走細(xì)胞。加入約 1 mL 冰浴預(yù)冷的 PBS，重懸細(xì)胞，并轉(zhuǎn)移到 1.5 mL 離心管內(nèi)。再次離心沉淀細(xì)胞，小心吸除上清，可以殘留約 50 μL 左右的 PBS，以避免吸走細(xì)胞。輕輕彈擊離心管底以適當(dāng)分散細(xì)胞，避免細(xì)胞成團(tuán)。
對于懸浮細(xì)胞：
（1）用1000 g 左右離心 3-5 min，沉淀細(xì)胞。注：對于特定的細(xì)胞，如果細(xì)胞沉淀不充分，可以適當(dāng)延長離心時(shí)間或稍稍加大離心力。
（2）小心吸除上清，可以殘留約 50 μL 左右的培養(yǎng)液，以避免吸走細(xì)胞。加入約 1 mL 冰浴預(yù)冷的 PBS，重懸細(xì)胞，并轉(zhuǎn)移到 1.5 mL 離心管內(nèi)。再次離心沉淀細(xì)胞，小心吸除上清，可以殘留約 50 μL 左右的 PBS，以避免吸走細(xì)胞。輕輕彈擊離心管底以適當(dāng)分散細(xì)胞，避免細(xì)胞成團(tuán)。
2.細(xì)胞固定：
（1）加入 1 mL 冰浴預(yù)冷 75-80%乙醇，輕輕吹打混勻，對于易成團(tuán)的細(xì)胞，要一邊加入乙醇一邊震蕩混勻。如果細(xì)胞株本身極易成團(tuán)，可以先將細(xì)胞充分重懸在250 μL 的 PBS 中，一邊逐滴加入 750 μL 的無水乙醇。乙醇終濃度控制在 75%左右即可，PBS 體積及無水乙醇體積可按比例調(diào)整。注：切記是先重懸在 PBS 中，不能重懸在培養(yǎng)基中再加無水乙醇！
（2）將 75-80%的乙醇重懸的樣品置于-20ºC，固定過夜。（如著急檢測，-20℃ 固定 1-2 h 也可以進(jìn)行檢測；乙醇固定的樣品可以在-20℃保存1個(gè)月）
（3）1000 g 左右離心 3-5 min， 沉淀細(xì)胞。注：對于特定的細(xì)胞，如果細(xì)胞沉淀不充分，可以適當(dāng)延長離心時(shí)間或稍稍加大離心力。
（4）小心吸除上清，可以殘留約 50 μL 左右的 75-80%乙醇，以避免吸走細(xì)胞。加入約 1 mL 冰浴預(yù)冷的 PBS，重懸細(xì)胞。再次離心沉淀細(xì)胞，盡可能將上清去除干凈。
3.碘化丙啶染色液的配制：
參考下表，根據(jù)待檢測樣品的數(shù)量配制適量的碘化丙啶染色液：

【注】：配制好的碘化丙啶染色液短時(shí)間內(nèi)可以 4ºC 保存，宜當(dāng)日使用。
4.染色：
（1）每管細(xì)胞樣品中加入 0.5 mL 碘化丙啶染色液， 緩慢并充分重懸細(xì)胞沉淀，室溫避光孵育 15-30 min。（2）隨后可以 4ºC 或冰浴避光存放，染色完成后宜在 24 小時(shí)內(nèi)完成流式檢測（建議能在當(dāng)日完成流式檢測）。
5.流式檢測和分析：
用流式細(xì)胞儀在 535 nm 激發(fā)波長， 615 nm 發(fā)射波長的通道檢測紅色熒光，同時(shí)檢測光散射情況。采用適當(dāng)分析軟件進(jìn)行細(xì)胞 DNA 含量分析和光散射分析。
注意事項(xiàng)

1. 本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。
2. 熒光染料均存在淬滅問題，保存和使用過程中請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。
3. 碘化丙啶對人體有刺激性，請注意適當(dāng)防護(hù)。
4. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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