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YPD Agar Medium 酵母

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更新時間:2021-02-05 09:31:28瀏覽次數:178次

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規格 應用領域 化工,生物產業
主要用途 科研
YPD Agar Medium 酵母
在酵母雙雜交系統中,“誘餌"蛋白X克隆至DNA-BD載體中,表達DNA-BD/X融合蛋白;待測試蛋白Y克隆至AD載體中,表達AD/Y融合蛋白。一旦X與Y蛋白間有相互作用,則DNA-BD和AD也隨之被牽拉靠近,恢復行使功能,報告重組體中LacZ和HIS3基因的表達

YPD Agar Medium 酵母

 英文名:YPD Agar Medium

描述:YPD系列培養基屬于Rich medium,也可以稱為*培養基。YPD Medium 由精選的蛋白胨、酵母提取物和葡萄糖按適當比例混合組成;YPDA培養基是在YPD培養基中添加了適量的硫酸腺嘌呤。YPD AgarYPDA Agar分別在YPDYPDA基礎上加入了Agar,作為固體培養基倒板用。YPD系列培養基用于釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的常規培養。

 

使用方法:

Rich Liquid Media (Broth)  

  • 50克的YPD或者YPDA1升的去離子水中溶解。  

2. pH 值在6.0±0.2范圍內,調整pH121℃高壓15分鐘。  

3. 避光、室溫條件下儲存培養基。  

Rich Plating Media with Agar  

  • 70克的YPD Agar或者YPDA Agar1升的去離子水中溶解(瓊脂在高壓后才能溶解)。
  • pH 值在6.0±0.2范圍內,調整pH121℃高壓15分鐘。  
  • 冷卻到50℃把培養基倒入平板中,室溫使其凝固。封口膜封好后倒置保存在4℃冰箱。

為什么我做的平板不凝?  

自行添加Agar,務必選用AgarCA1331),添加量為20 g/L。固體培養基不凝固可能是由于pH值偏低或者時間過長(也會降低pH值);水質偏酸也會使得培養基偏酸,建議前調整YPD系列培養基的pH6.5121℃,高壓15min,及時從鍋內取出培養基。

 雙雜交系統的建立得力于對真核生物調控轉錄起始過程的認識。細胞起始基因轉錄需要有反式轉錄因子的參與。80年代的工作表明, 轉錄因子在結構上是組件式的(modular), 即這些因子往往由兩個或兩個以上相互的結構域構成,其中有DNA結合結構域(DNA binding domain,簡稱為BD)和轉錄結構域(activation domain,簡稱為AD),它們是轉錄因子發揮功能所的。單獨的BD雖然能和啟動子結合,但是不能轉錄。而不同轉錄因子的BD和AD形成的雜合蛋白仍然具有正常的轉錄的功能。如酵母細胞的Gal4蛋白的BD與大腸桿菌的一個酸性結構域B42融合得到的雜合蛋白仍然可結合到Gal4結合位點并轉錄。

在酵母雙雜交系統中,“誘餌”蛋白X克隆至DNA-BD載體中,表達DNA-BD/X融合蛋白;待測試蛋白Y克隆至AD載體中,表達AD/Y融合蛋白。一旦X與Y蛋白間有相互作用,則DNA-BD和AD也隨之被牽拉靠近,恢復行使功能,報告重組體中LacZ和HIS3基因的表達

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yyp2021.2.3

 

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