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簡單介紹一下振動圓二色測試的注意事項
閱讀：2444發(fā)布時間：2020-5-18
振動圓二色是應(yīng)用較為廣泛的測定蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)的方法，是研究稀溶液中蛋白質(zhì)構(gòu)象的一種快速、簡單、較的方法。它可以在溶液狀態(tài)下測定，較接近其生理狀態(tài)。而且測定方法快速簡便，對構(gòu)象變化靈敏，所以它是目前研究蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)的主要手段之一，并已廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)的構(gòu)象研究中。用于推斷非對稱分子的構(gòu)型和構(gòu)象的一種旋光光譜。光學(xué)活性物質(zhì)對組成平面偏振光的左旋和右旋圓偏振光的吸收系數(shù)(ε)是不相等的，εL≠εR，即具有圓二色性。如果以不同波長的平面偏振光的波長λ為橫坐標(biāo)，以吸收系數(shù)之差Δε=εL-εR為縱坐標(biāo)作圖，得到的圖譜即是圓二色光譜，簡稱CD。如果某手性化合物在紫外可見區(qū)域有吸收，就可以得到具有特征的圓二色光譜。由于εL≠εR，透射光不再是平面偏振光，而是橢圓偏振光，摩爾橢圓度[θ]與Δε的關(guān)系為：[θ]=3300Δε。振動圓二色也可以摩爾橢圓度為縱坐標(biāo)，以波長為橫坐標(biāo)作圖。由于△ε有正值和負(fù)值之分，所以也有呈峰的正性圓二色譜和呈谷的負(fù)性圓二色譜。在紫外可見光區(qū)域測定與旋光譜，其目的是推斷有機化合物的構(gòu)型和構(gòu)象。
振動圓二色測試事項
(1)在標(biāo)準(zhǔn)操作時，譜帶寬度選為1nm。對于高分辨率測量，要用較窄的狹縫寬度，此時光電倍增管的電壓較高，譜的信噪比差。雖然對于正常測量較佳譜帶寬度是1~2nm，但是在下列情況下要犧牲分辨率而需要較寬的狹縫寬度。當(dāng)樣品的吸光度很高但CD信號很弱時，一方面要盡量測定CD峰所需要的足夠濃度，另一方面要設(shè)置較寬的狹縫。不過此時要特別小心，因為樣品在吸光度過高(A>2)的情況下可能存在熒光或雜散光引起的某些假象。另外，在固體CD光譜測試時也需要較大的狹縫寬度(一般要求>2nm)。
(2)橢圓率和摩爾橢圓率都依賴于測量條件。因此，溫度、波長和樣品濃度總是應(yīng)該特別注明的。
(3)當(dāng)用壓片法或石蠟油研磨法進行固體粉末樣品測試時，要盡可能地研磨獲得細(xì)小均勻的樣品顆粒。采用石蠟油糊方法時，必須注意某些憎水有機化合物可能溶于石蠟油中，這時所得CD光譜在某種意義上應(yīng)視為溶液CD光譜。采用壓片法測試固體CD時，在手性樣品的定性濃度達(dá)到CD光譜儀檢測要求的同時，片越薄越透明越好(但切忌破損)。在某些情況下，壓片法不適用于手性抗衡陰離子存在下的固體誘導(dǎo)CD光譜的測定。
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