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產品名稱:原代肝癌條件重編程培養基(Human Hepatocarcinoma Conditional Reprogramming Medium)
產品說明:原代肝癌條件重編程培養基(Human Hepatocarcinoma Conditional Reprogramming Medium)是一種為促進肝癌原代細胞體外生長而設計的*培養基。它是一種無菌的液體混合系統,含有必需和非必需的氨基酸、維生素、有機和無機化合物、激素、生長因子、微量礦物質等。培養基基于碳酸氫鹽的緩沖體系,在5%CO2/95%空氣的培養箱中平衡時,pH值為7.4。該培養基的配方可以提供一個理想平衡的營養環境,選擇性地促進體外人肝癌原代細胞的生長。
產品優勢:
(1) 培養成功率高
(2) 體外持續擴增
(3) 保持腫瘤原始病理特征
(4) 藥敏結果宇臨床數據接近
使用說明
?使用前準備
(1) 15mL無菌離心管、移液器、移液管、無菌槍頭等表面消毒后放入生物安全柜中紫外照射30 min
(2)提前30min從4 ℃冰箱取出原代細胞培養基平衡至室溫。
(3)γ 射線照射過的NIH-3T3細胞(40 Gy輻照)。
?肝癌原代上皮細胞培養
(1)獲取的人源肝癌原代細胞,按照表1中細胞數接種在合適的培養器皿中,加入y射線輻照后的NIH-3T3細胞(添加滋養細胞數量如表1和表2所示)。
(2)原代細胞初次接種后2-3天勿動(利于細胞貼壁),培養過程中若培養基顏色變黃但細胞未長滿時可進行半換液,鏡下觀察細胞未長滿但3T3細胞已不足時,適量補充γ射線輻照后的3T3細胞(一般補加初始數目的一半)。
?肝癌原代上皮傳代
(1)鏡下觀察細胞形成克隆,且匯合度85~95%時即可傳代。
(2)培養箱中取出細胞,棄舊培養液,0.05%胰酶洗滌5秒后吸盡,再加入適量0.05%胰酶,37℃孵育,2~5 min后拿出輕拍培養瓶/板側面,顯微鏡下觀察細胞消化情況。
(3)細胞消化至細胞變圓并開始脫落時用原代細胞終止培養基終止消化,并將細胞轉移至離心管中,1500 rpm,3min。
(4)棄上清,以1~5mL相對應的原代細胞培養基重懸細胞,活細胞計數,將細胞懸液按適合的細胞密度接種于培養瓶/板,加入γ射線輻照后的NIH-3T3細胞(不同規格培養瓶/板底面積、接種原代細胞數量、添加滋養細胞數量如表1、表2所示),補加腸癌培養基至所需體積,十字交叉混勻,培養容器75%表面消毒后置培養箱,37℃、5%CO2條件培養。其他步驟同上。
注意事項:
1.本產品在使用前需平衡至室溫。
2.使用產品時應注意無菌操作,避免污染。
3.本產品中含有原代細胞專用抗生素,如無特別需要不用額外再添加雙抗,可直接使用。
4.為保持本產品的理想使用效果,不宜將其過夜放置于室溫或較高的溫度環境中。
5.請于保質期內使用本產品,超出保質期,必須放棄使用。
6.本產品僅用于科研用途,不能用于體外診斷。