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產(chǎn)品名稱:原代宮頸癌條件重編程培養(yǎng)基(Human Cervical Carcinoma Conditional Reprogramming Medium)
產(chǎn)品說明:原代宮頸癌條件重編程培養(yǎng)基(Human Cervical Carcinoma Conditional Reprogramming Medium)是一種為促進宮頸鱗癌原代細胞體外生長而設(shè)計的培養(yǎng)基。它是一種無菌的液體混合系統(tǒng),含有必需和非必需的氨基酸、維生素、有機和無機化合物、激素、生長因子、微量礦物質(zhì)等。該培養(yǎng)基產(chǎn)品基于碳酸氫鹽的緩沖體系,在5%CO。/95%空氣的培養(yǎng)箱中平衡時,pH值為7.4。該培養(yǎng)基的配方可以提供一個理想平衡的營養(yǎng)環(huán)境,選擇性地促進體外人宮頸鱗癌原代細胞的生長。
產(chǎn)品優(yōu)勢:
(1) 培養(yǎng)成功率高
(2) 體外持續(xù)擴增
(3) 保持腫瘤原始病理特征
(4) 藥敏結(jié)果宇臨床數(shù)據(jù)接近
使用說明
?使用前準備
(1) 15mL無菌離心管、移液器、移液管、無菌槍頭等表面消毒后放入生物安全柜中紫外照射30 min;提前30min從4 ℃冰箱取出原代細胞培養(yǎng)基平衡至室溫。
(2)γ 射線照射過的NIH-3T3細胞(40 Gy輻照)。
?宮頸癌原代細胞培養(yǎng)
(1)初次分離的宮頸癌小樣本細胞懸液一般無需計數(shù),直接種入12孔板中。
(2)宮頸癌術(shù)中樣本過70微米篩網(wǎng)后計數(shù),按照表1中細胞數(shù)接種在合適的培養(yǎng)器皿中,加入γ射線輻照后的NIH-3T3細胞(添加滋養(yǎng)細胞數(shù)量如表1所示)。
(3)原代細胞初次接種后2-3天勿動(利于細胞貼壁),培養(yǎng)過程中若培養(yǎng)基顏色變黃但細胞未長滿時可換半液,鏡下觀察細胞未長滿但3T3細胞已不足時,適量補充γ射線輻照后的3T3細胞(一般補加初始數(shù)目的一半)。
注:針對實體瘤樣本,細胞粒徑大于10微米進行計數(shù);倍增時間>48小時則定義為增殖較慢的細胞;對于增殖較快細胞,可以綜合倍增時間、接種器皿的規(guī)格以及培養(yǎng)周期來估算接種的細胞數(shù)量;表格供參考,具體實驗具體對待。
?宮頸癌原代細胞傳代
(1)鏡下觀察細胞形成克隆,且匯合度達到80~90%時即可傳代。
(2)培養(yǎng)箱中取出細胞,棄舊日培養(yǎng)液,0.25%胰酶洗滌30秒后吸盡,再加入適量0.05%胰酶,37℃孵育,5min后拿出輕拍培養(yǎng)瓶/板側(cè)面,顯微鏡下觀察細胞消化情況。
(3)細胞消化至細胞變圓并開始脫落時用原代細胞終止培養(yǎng)基終止消化,并將細胞轉(zhuǎn)移至離心管中,1500 rpm, 3 min。
(4)棄上清,以1-2mL條件培養(yǎng)基重懸細胞,活細胞計數(shù),將細胞懸液按適合的細胞密度接種于培養(yǎng)瓶/板,加入y射線輻照后的NIH-3T3細胞(不同規(guī)格培養(yǎng)瓶/板底面積、接種原代細胞數(shù)量、添加滋養(yǎng)細胞數(shù)量如表1所示),補加宮頸癌培養(yǎng)基至所需體積,輕輕搖晃混勻,表面消毒后置培養(yǎng)箱,37℃、5%CO2條件培養(yǎng)。其他步驟同上。
注意事項:
1.本產(chǎn)品在使用前需平衡至室溫。
2.本產(chǎn)品中含有胎牛血清和原代細胞專用抗生素,如無特別需要不用額外再添加血清和雙抗,可直接使用。
3.樣本需為腫瘤組織,且腫瘤細胞比例越高(>50%),培養(yǎng)成功率越高。
4.為保持本產(chǎn)品的理想使用效果,不宜將其過夜放置于室溫或較高的溫度環(huán)境中。
5.請于保質(zhì)期內(nèi)使用本產(chǎn)品,超出保質(zhì)期,必須放棄使用。
6.原代細胞初次接種時會貼壁較慢和貼壁不牢,若無必要,盡量減少取出觀察的次數(shù),建議2~3天一次。
7.傳代消化時切記不要消化過度,不宜超過5min,對細胞造成損傷,影響細胞狀態(tài)。
8.接種細胞時注意細胞密度,不可過稀或過密。
9.使用產(chǎn)品時應(yīng)注意無菌操作,避免污染。
10.本產(chǎn)品僅用于科研用途,不能用于體外診斷。