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目錄:上海貝博生物科技有限公司>>蛋白質(zhì)生物學(xué)>>蛋白提取和裂解>> 細(xì)菌膜蛋白提取試劑盒（2D電泳用）

細(xì)菌膜蛋白提取試劑盒（2D電泳用）
  • 細(xì)菌膜蛋白提取試劑盒（2D電泳用）
參考價 面議
具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)
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具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 品牌 貝博生物
  • 型號
  • 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
  • 所在地
屬性

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更新時間：2024-11-24 15:31:43瀏覽次數(shù)：82評價

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產(chǎn)品概述 product description 貝博® BBproExtra® 細(xì)菌膜蛋白提取試劑盒（雙向電泳用）是一種快速高效的高產(chǎn)膜蛋白提取試劑盒。細(xì)菌膜蛋白提取試劑盒可以從各種革蘭氏陽性和陰性細(xì)菌中提取膜蛋白，可用于純化膜蛋白的粗品制備及膜蛋白制備。提取過程簡單方便。該試劑盒含有蛋白酶抑制劑混合物和磷酸酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高質(zhì)量的蛋白提供了保證。 提取的蛋白樣品中不含鹽，可以直接用于等電聚焦、雙向電泳等。如下游實驗不需要直接用于等電聚焦、雙向電泳，可選用貝博用于Western Blotting、普通蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗的其他試劑盒（相關(guān)產(chǎn)品BB-3151）。
保存溫度
2-8℃
注意事項
1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
3.試劑拆封后請盡快使用完！
有效期
一年
檢測方法
雙向電泳
適用樣本
細(xì)菌
產(chǎn)品特點
1、 使用方便。
2、 含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。
3、 紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。
4、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含7種獨立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
產(chǎn)品應(yīng)用
雙向電泳
儀器準(zhǔn)備
1.離心機
2.振蕩器
3.渦旋混勻器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
試劑準(zhǔn)備
1.PBS緩沖液
2.蛋白定量試劑盒
耗材準(zhǔn)備
1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套
使用注意事項
使用注意事項：
? 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
? 實驗過程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
? 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。
? 可以根據(jù)自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
? 提取液A在使用前須一直置于2-8℃條件，否則下游膜蛋白提取時會導(dǎo)致不容易分層。

?
使用方法
1. 提取液制備：
每500ul冷的提取液A中加入5ul提取液B 和2ul蛋白酶抑制劑混合物，充分混勻后置冰上備用。
2. 離心收集菌體，用PBS洗菌體2次。
3. 按每100-150mg濕重菌體樣本加入500ul冷的提取液A（大約菌體和提取液體積比1:3-1:5，淹沒菌體即可），吹打混勻，在2-8℃振蕩1-2小時，至菌體裂解，菌體沉淀減少。
4. 將菌液在2-8℃低溫下12000×g離心5分鐘，取上清。
5. 在37℃水浴10分鐘。
6. 在37℃， 1000×g離心3分鐘。
7. 此時液體分為2層，小心移除上層溶液，留管底部下層，大約50ul液體。
8. 用1-2倍體積的膜蛋白溶解液溶解該溶液，即得細(xì)菌膜蛋白樣品。
9. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌嶒灐?br>
常見問題分析
1.蛋白濃度低？
膜蛋白豐度較低，需要盡可能加大細(xì)胞上樣量。
處理部分組織樣本時可能沒有裂解，導(dǎo)致蛋白濃度低。只要適當(dāng)延長試劑A的處理時間即可。在持續(xù)振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。

2.用什么方法定量蛋白？
建議用BCA法。不適合用Bradford法，因為試劑A中含有干擾Bradford法的組份，導(dǎo)致定量不準(zhǔn)。如果已經(jīng)進行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。

3.膜蛋白電泳沒有條帶？
膜蛋白樣品通常濃度較低，電泳前一定要進行蛋白定量，以保證電泳是蛋白上樣量足夠。
膜蛋白提取好后，用溶解液充分溶解后，可以超聲處理一下，再進行蛋白定量。
有些樣品的膜蛋白含量太低，可以使用丙酮沉淀膜蛋白，再使膜蛋白溶解于上樣緩沖液中，一般可以跑出清晰的蛋白條帶。

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