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目錄:上海貝博生物科技有限公司>>蛋白質生物學>>蛋白提取和裂解>> 植物高爾基體蛋白提取試劑盒

植物高爾基體蛋白提取試劑盒
  • 植物高爾基體蛋白提取試劑盒
參考價 面議
具體成交價以合同協議為準
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  • 品牌 貝博生物
  • 型號
  • 廠商性質 生產商
  • 所在地
屬性

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更新時間：2024-11-24 15:55:22瀏覽次數：82評價

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產品概述 product description 貝博® BBproExtra® 植物高爾基體蛋白提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種新鮮植物組織樣本中提取高爾基體蛋白。 本試劑盒含有的配方能夠有效溶解高爾基體組份，本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對蛋白的降解，為提取高純度的蛋白提供了保證。 本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質電泳、免疫沉淀、ELISA、蛋白活性測定等下游蛋白研究實驗。 本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構象的活性蛋白，下游應用范圍廣。 本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應用兼容。
保存溫度
2-8℃
注意事項
1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。
3.試劑拆封后請盡快使用完！
有效期
一年
檢測方法
WB,IP等
適用樣本
植物
產品應用
WB,IP等
儀器準備
1.離心機
2.振蕩器
3.渦旋混勻器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
試劑準備
1.PBS緩沖液
2.蛋白定量試劑盒
耗材準備
1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套
使用注意事項
使用注意事項：
? 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
? 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
? 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。
? 如果試劑盒不能短時間內用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
? 可以根據自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
? 下游實驗如果是進行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測，提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑，注意提取過程保持低溫操作，縮短離心時間。
? 使用Dounce勻漿器勻漿，如果沒有Dounce勻漿器，用普通玻璃勻漿器勻漿也可，但是高爾基體回收率會下降。

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使用方法
1. 提取液準備：
每500ul冷的蛋白提取液C中加入2ul蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。
2. 取200-500mg新鮮植物葉片組織樣本，用PBS洗滌干凈。
3. 用刀盡可能剪碎。
4. 加入1ml冷的試劑 A，置冰上10分鐘。
5. 用Dounce勻漿器充分勻漿30-40次。
6. 將勻漿液在4℃，1000×g力條件下離心10分鐘。棄沉淀，收集上清。
7. 將上清在4℃，3000×g力條件下離心10分鐘。棄沉淀，收集上清。
8. 將上清在4℃，6000×g力條件下離心10分鐘。棄沉淀，收集上清。
9. 將上清在4℃，50000×g力條件下離心20分鐘。
10. 棄上清，在沉淀中加入500μl冷的試劑B，混勻。
11. 在4℃，50000×g力條件下離心30分鐘。棄上清，收集沉淀。
12. 在沉淀中加入100-300ul冷的蛋白提取液C，吹打混勻后，在4℃條件下振蕩20-30分鐘。
13. 在4℃，12000×g條件下離心15分鐘。
14. 將上清吸入另一預冷的干凈離心管，即可得到高爾基體蛋白。
15. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存備用或直接用于下游實驗。
常見問題分析
1.蛋白濃度低？
處理部分組織樣本時可能沒有裂解，導致蛋白濃度低。只要適當延長試劑C的處理時間即可。在持續振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。
2.用什么方法定量蛋白？
建議用BCA法。不適合用Bradford法，因為試劑C中含有干擾Bradford法的組份，導致定量不準。如果已經進行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。
3.提取的蛋白具有活性嗎？
本試劑盒不含有離子型去垢劑組份，不破壞蛋白的結構，沒有對蛋白質之間原有的相互作用的破壞，蛋白均保持其天然構象和活性。

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