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目錄:上海貝博生物科技有限公司>>蛋白質生物學>>蛋白提取和裂解>> 酵母核蛋白提取試劑盒

酵母核蛋白提取試劑盒
  • 酵母核蛋白提取試劑盒
參考價 面議
具體成交價以合同協議為準
參考價 面議
具體成交價以合同協議為準
  • 品牌 貝博生物
  • 型號
  • 廠商性質 生產商
  • 所在地
屬性

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更新時間:2024-11-24 16:11:13瀏覽次數:86評價

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產品概述 product description 貝博® BBproExtra® 酵母核蛋白提取試劑盒提供全套試劑,適用于從各種酵母中提取核蛋白。提取過程簡單方便。制備的核蛋白純度高,保持天然活性,絕少交叉污染。 本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物,阻止了蛋白酶對蛋白的降解,為提取高純度的蛋白提供了保證。 本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質電泳、免疫沉淀、ELISA、轉錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。 本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構象的活性蛋白。 本試劑盒中不含有EDTA,與金屬螯和層析等下游應用兼容。
保存溫度
2-8℃
注意事項
1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態,從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴,變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。
3.試劑拆封后請盡快使用完!
有效期
一年
檢測方法
WB,IP等
適用樣本
酵母
產品特點
1.使用方便,從細胞,組織中提取蛋白不需經過研磨、反復凍融、超聲破碎等前處理。
2.將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。
3.含蛋白穩定劑,提取的蛋白穩定。
4.紫外檢測蛋白濃度時,背景干擾低。
5.蛋白提取液含多種有效成分,可以充分釋放胞漿蛋白、核蛋白,又可結合釋出的蛋白防止沉淀。
6.蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制劑配方優化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64,每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
產品應用
WB,IP等
儀器準備
1.離心機
2.振蕩器
3.渦旋混勻器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
試劑準備
1.PBS緩沖液
2.蛋白定量試劑盒
耗材準備
1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套
使用注意事項
使用注意事項:
? 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋內壁上的液體甩至管底,避免開蓋時液體灑落。
? 蛋白酶抑制劑在2-8℃時是固體狀態,從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴,變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。
? 實驗過程中的所有試劑須預冷;所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
? 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現沉淀,不影響使用,溶解后正常使用。
? 如果試劑盒不能短時間內用完,蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
? 可以根據自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
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使用方法
1. 提取液制備:
每200μl蛋白提取液D中分別加入2μl蛋白酶抑制劑混合物,混勻后置冰上備用。
2. 酵母培養物,在4℃,1000×g條件下離心5-10分鐘,小心吸取培養基,盡可能吸干,收集酵母沉淀。
3. 用PBS洗滌酵母兩次,每次洗滌后盡可能吸干上清。
4. 每100μl體積酵母沉淀物中加入200μl酵母核蛋白提取液A,混勻后,在30℃條件下保溫15分鐘。
5. 在1000×g條件下離心5-10分鐘,棄上清,收集酵母沉淀。
6. 用500μl PBS洗滌酵母一次,離心收集菌體。
7. 酵母沉淀物中加入300-500μl酵母蛋白提取液B,充分混勻。
8. 在37℃或室溫條件下輕微振蕩45-60分鐘。
9. 在1000×g條件下離心5-10分鐘,收集沉淀,棄上清。
10. 用500μl PBS洗滌沉淀。離心收集沉淀。
11. 沉淀中加入400μl酵母核提取液 C,高速渦旋15秒混勻,然后在振蕩器上振蕩15-30分鐘。
12. 再次高速渦旋振蕩5秒,然后在4℃,2000×g條件下離心5分鐘,棄上清,留沉淀。
13. 在沉淀中加入200μl冷的核蛋白提取液D,充分混勻。
14. 置振蕩器上振蕩30-40分鐘。
15. 在4℃,12000×g條件下離心10分鐘。
16. 將上清吸入另一預冷的干凈離心管,即可得到酵母核蛋白。
17. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存備用或直接用于下游實驗。
常見問題分析
1.蛋白濃度低?
處理部分酵母樣本時可能沒有裂解,導致蛋白濃度低。只要適當延長試劑BC的處理時間即可。在持續振蕩的條件下處理,沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。
酵母核蛋白豐度較低,在條件允許的情況下,加大酵母的上樣量。

2.用什么方法定量蛋白?
建議用BCA法。不適合用Bradford法,因為試劑D中含有干擾Bradford法的組份,導致定量不準。如果已經進行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系,則可以用Bradford法定量。

3.提取時出現膠狀沉淀?
蛋白提取液處理產物中有時會出現少量透明膠狀物,屬正常現象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復合物。不檢測和基因組DNA結合特別緊密的特定蛋白的情況下,可以直接離心取上清進行后續實驗即可;如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白,則可以通過超聲處理,300w/10秒間隔10秒,超聲3分鐘,隨后離心取上清用于后續實驗。

4.提取的蛋白具有活性嗎?
本試劑盒不含有離子型去垢劑組份,不破壞蛋白的結構,沒有對蛋白質之間原有的相互作用的破壞,蛋白均保持其天然構象和活性。

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