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2-8℃

1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。
3.試劑拆封后請盡快使用完！

一年

WB,IP等

動物組織

1.使用方便，從細胞，組織中提取蛋白不需經過研磨、反復凍融、超聲破碎等前處理。
2.提取過程簡單方便，將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。
3.含蛋白穩定劑，提取的蛋白穩定。
4.紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。
5.總蛋白提取液含多種有效成分，可以充分釋放胞漿蛋白、核蛋白和膜蛋白，又可結合釋出的蛋白防止沉淀。
6.蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

WB,IP等

1.離心機
2.振蕩器
3.勻漿機/勻漿器
4.渦旋混勻器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒

1.PBS緩沖液
2.蛋白定量試劑盒

1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套

使用注意事項：
? 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
? 蛋白酶抑制劑在2-8℃時是固體狀態，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。
? 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
? 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。
? 如果試劑盒不能短時間內用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
? 可以根據自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
? 下游實驗如果是進行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測，提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑，注意提取過程保持低溫操作，縮短離心時間。

1. 提取液制備：
每500ul冷的總蛋白提取液中加入2ul蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。
2. 取50-100mg組織樣本用剪刀剪碎，加入500ul總蛋白提取液，用組織勻漿器/勻漿機勻漿至無明顯肉眼可見固體。
3. 將組織勻漿吸入一預冷的干凈離心管中，在4℃條件下振蕩20-30分鐘。
4. 在4℃，12000×g條件下離心10分鐘。
5. 將上清吸入另一預冷的干凈離心管，即得到組織總蛋白。
6. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存備用或直接用于下游實驗。

1.蛋白濃度低？
處理部分組織樣本時可能沒有裂解，導致蛋白濃度低。只要適當延長試劑A的處理時間即可。在持續振蕩的條件下處理，沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。

2.細胞裂解速度慢？
為了充分保證提取得到的蛋白的活性，提取液采用的保護蛋白的配方，裂解能力溫和，下游應用范圍廣。適當延長裂解的時間即可。

3.用什么方法定量蛋白？
建議用BCA法。不適合用Bradford法，因為試劑A中含有干擾Bradford法的組份，導致定量不準。如果已經進行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系，則可以用Bradford法定量。

1.Bing Li,Xiaofang Tian,Chunlan Wang, et al.
SWATH label-free proteomics analyses revealed the roles of oxidative stress and antioxidant defensing system in sclerotia formation of Polyporus umbellatus
Sci Rep. 2017 （IF=5.228）

2.Yan Li, Lian Li, Zhiwei Li et al.
Tat PTD-Endostatin-RGD: A novel protein with anti-angiogenesis effect in retina via eye drops
Biochimica et Biophysica Acta 2016 （IF=5.083）

3.Jie Li,Mengmeng Xie ,et al.
Sex hormones regulate cerebral drug metabolism via brain miRNAs: down-regulation of brain CYP2D by androgens reduces the analgesic effects of tramadol
British Journal of Pharmacology 2015 （IF=5.259）

4.Pin Huan, Hongxia Wang et al.
Identification of differentially expressed proteins involved in the early larval development of the Pacific oyster Crassostrea gigas
Journal of Proteomics 2012 （IF=5.074）