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目錄:上海貝博生物科技有限公司>>蛋白質生物學>>蛋白提取和裂解>> 組蛋白提取試劑盒

組蛋白提取試劑盒
  • 組蛋白提取試劑盒
參考價 面議
具體成交價以合同協議為準
參考價 面議
具體成交價以合同協議為準
  • 品牌 貝博生物
  • 型號
  • 廠商性質 生產商
  • 所在地
屬性

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更新時間：2024-11-24 18:36:42瀏覽次數：150評價

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產品概述 product description 貝博® BBproExtra® 組蛋白提取試劑盒提供了一種簡單而應用廣泛的方法以及相應的試劑提取組蛋白。適用于從各種原代或傳代細胞和各種實體組織，如腦、脊髓、神經結或纖維、脂肪、肝臟、消化道、腎臟、心臟、肌肉、血管、結締組織等哺乳動物組織中提取組蛋白。提取過程簡單方便。 組蛋白提取產物的產量大約0.4 mg 每107 個細胞或100 mg 組織，不同的細胞和組織中，產量差異很大。 提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質電泳、組蛋白修飾實驗比如乙酰化、甲基化、sumoylation等下游蛋白研究。
保存溫度
2-8℃
注意事項
1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。
3.試劑拆封后請盡快使用完！
有效期
一年
檢測方法
WB,IP等
適用樣本
動物細胞/組織
產品特點
1.使用方便，從細胞，組織中提取蛋白不需經過研磨、反復凍融、超聲破碎等前處理。
2.提取過程簡單方便。
3.含蛋白穩定劑，提取的蛋白穩定。
4.紫外檢測蛋白濃度時，背景干擾低。
5.蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括蛋白酶、半蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
產品應用
WB,IP等
儀器準備
1.離心機
2.振蕩器
3.勻漿機/勻漿器
4.渦旋混勻器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒
試劑準備
1.PBS緩沖液
2.蛋白定量試劑盒
耗材準備
1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套
使用注意事項
使用注意事項：
? 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋內壁上的液體甩至管底，避免開蓋時液體灑落。
? 蛋白酶抑制劑在2-8℃時是固體狀態，從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴，變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。
? 實驗過程中的所有試劑須預冷；所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
? 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。
? 如果試劑盒不能短時間內用完，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
? 可以根據自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
? 下游實驗如果是進行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測，提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑，注意提取過程保持低溫操作，縮短離心時間。
使用方法
細胞組蛋白提取：
1. 提取液制備：
每500 μl蛋白提取液A中加入2 μl蛋白酶抑制劑混合物混勻后置冰上備用。
2. 收集5-10×106個細胞，在4℃，1000×g條件下離心5-10分鐘，吸干上清，收集細胞。
3. 用冷PBS洗滌細胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。
4. 每5-10×106個細胞中加入500 μl蛋白提取液A，混勻后，在4℃條件下輕輕振蕩10分鐘。
5. 在4℃，16000×g條件下離心15分鐘，棄上清。
6. 沉淀中加入100 μl組蛋白提取液B。
7. 用200 μl槍頭反復吹打混勻或充分渦旋振蕩混勻。
8. 置4℃冰箱過夜存放。
9. 16000×g條件下離心10分鐘，收集上清。
10. 在上清中加入10-25 μl 試劑C充分混勻。
11. 加入上樣緩沖液混勻后煮沸，分裝于-80℃冰箱保存備用或直接用于下游實驗。

組織組蛋白提取：
1. 提取液制備：
每500 μl蛋白提取液A中加入2μl蛋白酶抑制劑混合物混勻后置冰上備用。
2. 取100 mg組織樣本剪碎，加入蛋白提取液A，用組織勻漿器勻漿至無明顯肉眼可見固體。
3. 將組織勻漿吸入一預冷的干凈離心管中，在4℃條件下輕輕振蕩10分鐘。
4. 在4℃，16000×g條件下離心15分鐘，棄上清。
5. 沉淀中加入100 μl組蛋白提取液B。
6. 用200 μl槍頭反復吹打混勻或充分渦旋振蕩混勻，置4℃冰箱過夜存放。
7. 16000×g條件下離心10分鐘，收集上清。
8. 在上清中加入25 μl 試劑C充分混勻。
9. 加入上樣緩沖液混勻后煮沸，分裝于-80℃冰箱保存備用或直接用于下游實驗。

參考文獻
1.Fan Wei, et al.
Molecular cloning and subcellular localization of six HDACs and their roles in response to salt and drought stress in kenaf (Hibiscus cannabinus L.)
Biological Research 2019

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