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目錄:上海貝博生物科技有限公司>>蛋白質生物學>>蛋白提取和裂解>> 膜蛋白和胞漿蛋白提取試劑盒

膜蛋白和胞漿蛋白提取試劑盒
  • 膜蛋白和胞漿蛋白提取試劑盒
參考價 面議
具體成交價以合同協議為準
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具體成交價以合同協議為準
  • 品牌 貝博生物
  • 型號
  • 廠商性質 生產商
  • 所在地
屬性

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更新時間:2024-11-24 18:48:17瀏覽次數:152評價

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產品概述 product description 動物跨膜蛋白承擔各種生物功能,在疾病的發生、發展過程中扮演重要角色。膜蛋白樣品的制備需要充 分考慮到與下游的膠分析及質譜分析等應用配套,因此膜蛋白樣本制備成為一個難以逾越的挑戰。 貝博® BBproExtra® 膜蛋白和胞漿蛋白提取試劑盒是一種高效的高產膜蛋白提取試劑盒。本試劑盒提供全套試劑,適用于從細胞和動物組織提取膜蛋白和胞漿蛋白。提取過程簡單方便。 本試劑盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質電泳、免疫沉淀、ELISA、轉錄活性分析、Gel shift凝膠阻滯實驗、酶活性測定等下游蛋白研究實驗。 本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構象的活性蛋白。 本試劑盒中不含有EDTA,與金屬螯和層析等下游應用兼容。
保存溫度
2-8℃
注意事項
1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態,從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴,變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。
3.試劑拆封后請盡快使用完!
有效期
一年
檢測方法
WB,IP等
適用樣本
動物細胞/組織
產品特點
1.使用方便,從細胞,組織中提取蛋白不需經過研磨、反復凍融、超聲破碎等前處理。
2.提取過程簡單方便。
3.含蛋白穩定劑,提取的蛋白穩定。
4.紫外檢測蛋白濃度時,背景干擾低。
5.蛋白提取液含多種有效成分,可以充分釋放胞漿蛋白和膜蛋白,又可結合釋出的蛋白防止沉淀。
6.蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制劑配方優化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64,每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,包括蛋白酶、半蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
產品應用
WB,IP等
儀器準備
1.離心機
2.振蕩器
3.勻漿機/勻漿器
4.渦旋混勻器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒
試劑準備
1.PBS緩沖液
2.蛋白定量試劑盒
耗材準備
1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套
使用注意事項
使用注意事項:
? 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋內壁上的液體甩至管底,避免開蓋時液體灑落。
? 實驗過程中的所有試劑須預冷;所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
? 蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現沉淀,不影響使用,溶解后正常使用。
? 可以根據自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
? Western實驗內參可以選用Tubulin、Na-K ATPase。
? 提取液A在使用前須一直置于2-8℃條件,否則下游膜蛋白提取時會導致不容易分層。
? 膜蛋白電泳時loading buffer應該避免煮沸。
? 膜蛋白電泳時可以提高loading buffer的SDS含量。

使用方法
A. 細胞蛋白提取
1. 提取液準備:
每500 μl冷的蛋白提取液A中加入2 μl蛋白酶抑制劑混合物,2 μl蛋白穩定劑,混勻后置冰上備用。
每500 μl膜蛋白溶解液C中加入2 μl蛋白酶抑制劑混合物,混勻后置冰上備用。
2. 取5-10×106個以上細胞,在4℃,500×g條件下離心2-3分鐘,小心吸取培養基,盡可能吸干,收集細胞。
3. 用冷PBS洗滌細胞兩次,每次洗滌后盡可能吸干上清。
4. 細胞樣品中加入200 μl冷的試劑 A,高速渦旋振蕩5秒,置2-8℃振蕩30分鐘-1小時。
5. 再次高速渦旋振蕩5秒,然后在4℃,13000×g條件下離心5分鐘。
6. 將上清吸入另一預冷的干凈離心管,37℃水浴10分鐘,37℃條件 2000g離心3分鐘,此時溶液分為兩層,下層約為20-50 μl。
7. 小心收集上層,即為胞漿蛋白。下層為膜蛋白。
8. 用150-200 μl冰冷的試劑B稀釋下層膜蛋白部分,混勻后冰浴2分鐘,然后37℃水浴5-10分鐘,37℃條件 500-2000g離心3分鐘,此時溶液分為兩層,下層約為20-50 μl。
9. 小心移除上層,用50-200 μl冰冷的試劑C溶解下層,即得膜蛋白。
10. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存備用或直接用于下游實驗。

B. 組織蛋白提取
1. 取適量組織樣本用刀盡可能剪碎,加入冷的蛋白提取液A,用組織勻漿機/勻漿器勻漿至無明顯肉眼可見固體,將勻漿吸入另一預冷的干凈離心管。
2. 按照細胞蛋白的提取方法的第3步驟往下操作即可。

常見問題分析
1.蛋白濃度低?
膜蛋白豐度比較低,在條件允許的情況下,需要盡可能加大細胞的上樣量以提高膜蛋白濃度。
處理部分組織樣本時可能沒有裂解,導致蛋白濃度低。只要適當延長試劑A的處理時間即可。在持續振蕩的條件下處理,沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。

2.用什么方法定量蛋白?
建議用BCA法。不適合用Bradford法,因為試劑A中含有干擾Bradford法的組份,導致定量不準。如果已經進行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系,則可以用Bradford法定量。

3.提取的蛋白具有活性嗎?
本試劑盒不含有離子型去垢劑組份,不破壞蛋白的結構,沒有對蛋白質之間原有的相互作用的破壞,蛋白均保持其天然構象和活性。

4.膜蛋白電泳沒有條帶?
膜蛋白樣品通常濃度較低,電泳前一定要進行蛋白定量,以保證電泳是蛋白上樣量足夠。
膜蛋白提取好后,用溶解液充分溶解后,可以超聲處理一下,再進行蛋白定量。
蛋白加Loading buffer后可以不用煮沸,采用50℃保溫30分鐘。
蛋白Loading buffer中SDS終濃度含量可以提高至3%-10%。
有些樣品的膜蛋白含量太低,可以使用丙酮沉淀膜蛋白,再使膜蛋白溶解于上樣緩沖液中,一般可以跑出清晰的蛋白條帶。
電泳時采用低電壓低電流電泳。
膜蛋白豐度通常較低,有條件可以嘗試用銀染染色。
參考文獻
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A study on the degradation efficiency of fluoranthene and the transmembrane protein mechanism of Rhodococcus sp. BAP-1 based on iTRAQ
Science of The Total Environment 2020 (IF=6.551)

2.YubinFeng, et al.
ATPR-induced differentiation and G0/G1 phase arrest in acute promyelocytic leukemia by repressing EBP50/NCF1 complex to promote the production of ROS
Toxicology and Applied Pharmacology 2019 (IF=3.585)

3.Cuilian Yu, et al.
Taishan Pinus massoniana pollen polysaccharide inhibits subgroup J avian leucosis virus infection by directly blocking virus infection and improving immunity
Sci Rep. 2017 (IF=5.228)

4.Xiaoyun Lin, et al.
Chimerically fused antigen rich of overlapped epitopes from latent membrane protein 2 (LMP2) of Epstein–Barr virus as a potential vaccine and diagnostic agent
Cellular & Molecular Immunology 2016 (IF=8.213)

5.Ge Zhao, et al.
Phage Display against Corneal Epithelial Cells Produced Bioactive Peptides That Inhibit Aspergillus Adhesion to the Corneas
PLoS ONE March 2012 | Volume 7 | Issue 3, (IF=4.411)

6.Lihong Liao, et al.
The Influence of Down-Regulation of Suppressor of Cellular Signaling Proteins by RNAi on Glucose Transport of Intrauterine Growth Retardation Rats
Pediatric Research 2011 Volume 69, Issue 6, pp 497-503 (IF=2.882)

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