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目錄:上海貝博生物科技有限公司>>蛋白質生物學>>蛋白提取和裂解>> 總蛋白提取試劑盒

總蛋白提取試劑盒
  • 總蛋白提取試劑盒
參考價 面議
具體成交價以合同協議為準
參考價 面議
具體成交價以合同協議為準
  • 品牌 貝博生物
  • 型號
  • 廠商性質 生產商
  • 所在地 上海市
屬性

供貨周期:一周 應用領域:生物產業

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更新時間:2024-11-24 18:57:02瀏覽次數:289評價

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供貨周期 一周 應用領域 生物產業
總蛋白提取試劑盒含有的配方能夠有效溶解細胞膜組份,包括細胞質膜、核膜和各種細胞器膜。本試劑盒含有的蛋白酶抑制劑混合物,阻止了蛋白酶對蛋白的降解,為提取高純度的蛋白提供了保證。
保存溫度
2-8℃
總蛋白提取試劑盒注意事項
1.蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲存。開蓋使用后-20℃儲存。
2.蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時是固體狀態,從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴,變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。
3.試劑拆封后請盡快使用完!    

有效期

一年

檢測方法
WB,IP,co-IP,ELISA,EMSA等
適用樣本
動物細胞/組織
總蛋白提取試劑盒產品特點
1.使用方便,從細胞,組織中提取蛋白不需經過研磨、反復凍融、超聲破碎等前處理。
2.提取過程簡單方便,將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。
3.含蛋白穩定劑,提取的蛋白穩定。
4.紫外檢測蛋白濃度時,背景干擾低。
5.總蛋白提取液含多種有效成分,可以充分釋放胞漿蛋白、核蛋白和膜蛋白,又可結合釋出的蛋白防止沉淀。
6.蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制劑配方優化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64,每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,包括蛋白酶、半蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
產品應用
WB,IP,co-IP,ELISA,EMSA等
儀器準備
1.離心機
2.振蕩器
3.勻漿機/勻漿器
4.渦旋混勻器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒
試劑準備
1.PBS緩沖液
2.蛋白定量試劑盒
耗材準備                        
1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套
使用注意事項
?旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋內壁上的液體甩至管底,避免開蓋時液體灑落。
?蛋白酶抑制劑在2-8℃時是固體狀態,從冰箱取出后恢復至室溫或37℃短時間水浴,變成液體狀態后離心至管底部再開蓋。
?實驗過程中的所有試劑須預冷;所有器具須放-20℃冰箱預冷。整個過程須保持樣品處于低溫。
?蛋白酶抑制劑儲存期間溶液如果出現沉淀,不影響使用,溶解后正常使用。
?如果試劑盒不能短時間內用完,蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。
?可以根據自己實驗需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。
?下游實驗如果是進行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性檢測,提取液可以不加蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑,注意提取過程保持低溫操作,縮短離心時間。
?Western Blot實驗內參可以選用beta-actin、GAPDH、Tubulin。
離心機轉速有相對離心力(RCF,×g)和每分鐘轉速(RPM,r/min)兩種表示方式,有些離心機設置有RPM和×g顯示切換,但部分離心機沒有自動切換功能。需要用下面的公式進行換算:g=r×1.118×10-5×rpm2 (r 為有效離心半徑,即從離心機軸心到離心收集管底部中心位置的長度,單位為厘米) 例如: 轉速為3000rpm,有效離心半徑為10 cm,則相對離心力(RCF,×g)為=10×1.118×10-5×30002=1006.2(×g)。
使用方法
細胞樣本總蛋白提取:
懸浮細胞蛋白提取:
1. 提取液準備:
每500 μl冷的總蛋白提取液中加入2 μl蛋白酶抑制劑混合物和2 μl磷酸酶抑制劑混合物,混勻后置冰上備用。
2. 取5×106個細胞,在4℃,2500×g條件下離心5分鐘,小心吸取培養基,盡可能吸干,收集細胞。
3. 用冷PBS洗滌細胞兩次,每次洗滌后盡可能吸干上清。
4. 每5×106 -1×107個細胞(大約50 mg細胞/50 μl細胞沉淀體積)中加入500 μl冷的總蛋白提取液,吹打混勻后,在4℃條件下振蕩20-30分鐘,至細胞充分裂解,無明顯細胞沉淀。
5. 在4℃,12000×g條件下離心15分鐘。
6. 將上清吸入另一預冷的干凈離心管,即可得到總蛋白。
7. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存備用或直接用于下游實驗。

貼壁細胞蛋白提取:
1. 提取液準備:
每500 μl冷的總蛋白提取液中加入2 μl蛋白酶抑制劑混合物和2 μl磷酸酶抑制劑混合物,混勻后置冰上備用。
2. 小心吸取貼壁細胞的培養液。
3. 用冷PBS洗滌細胞兩次,每次洗滌后盡可能吸干PBS。
4. 加入適量冷的總蛋白提取液,振蕩15-30分鐘,至細胞充分裂解,用細胞刮刀刮一遍,將裂解液吸入另一干凈離心管。
5. 在4℃,12000×g條件下離心15分鐘。
6. 將上清吸入另一預冷的干凈離心管,即得到總蛋白。
7. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存備用或直接用于下游實驗。
組織樣本總蛋白提取:
1. 提取液準備:
每500 μl冷的總蛋白提取液中加入2 μl蛋白酶抑制劑混合物和2 μl磷酸酶抑制劑混合物,混勻后置冰上備用。
2. 取50-100 mg組織樣本,用PBS洗干凈,然后用刀盡可能剪碎,加入500 μl總蛋白提取液,用組織勻漿器/勻漿機勻漿至無明顯肉眼可見固體。
3. 將組織勻漿吸入一預冷的干凈離心管中,在4℃條件下振蕩10-20分鐘。
4. 在4℃,10000-14000×g條件下離心15分鐘。
5. 將上清吸入另一預冷的干凈離心管,即得到總蛋白。
6. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存備用或直接用于下游實驗。

常見問題分析
1.蛋白濃度低?
處理部分組織樣本時可能沒有裂解,導致蛋白濃度低。只要適當延長試劑A的處理時間即可。在持續振蕩的條件下處理,沒有振蕩器也可間隔幾分鐘用吸頭吹打混勻。

2.細胞裂解速度慢?
為了充分保證提取得到的蛋白的活性,提取液采用的保護蛋白的配方,裂解能力溫和,下游應用范圍廣。適當延長裂解的時間即可。

3.用什么方法定量蛋白?
建議用BCA法。不適合用Bradford法,因為試劑A中含有干擾Bradford法的組份,導致定量不準。如果已經進行過透析處理或者用脫鹽柱改換過緩沖體系,則可以用Bradford法定量。

4.提取時出現膠狀沉淀?
蛋白提取液處理產物中有時會出現少量透明膠狀物,屬正常現象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復合物。不檢測和基因組DNA結合特別緊密的特定蛋白的情況下,可以直接離心取上清進行后續實驗即可;如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白,則可以通過超聲處理,300w/10秒間隔10秒,超聲3分鐘,隨后離心取上清用于后續實驗。檢測一些常見的轉錄因子,例如NF-kappaB、p53等時,不必進行超聲處理。

5.提取的蛋白具有活性嗎?
本試劑盒不含有離子型去垢劑組份,不破壞蛋白的結構,沒有對蛋白質之間原有的相互作用的破壞,蛋白均保持其天然構象和活性。
參考文獻
1.Keyu Luo et al.  
Multiple integrin ligands provide a highly adhesive and osteoinductive surface that improves selective cell retention technology
Acta biomaterialia      2019       (IF=6.638)

2.Chang Yu et al.  
Targeted iron nanoparticles with platinum-(IV) prodrugs and anti-EZH2 siRNA show great synergy in combating drug resistance in vitro and in vivo
Biomaterials      2018       (IF=10.317)

3.Bing Li et al.    
SWATH label-free proteomics analyses revealed the roles of oxidative stress and antioxidant defensing system in sclerotia formation of Polyporus umbellatus
Sci Rep.      2017       (IF=5.228)

4.Yan Li et al.
Tat PTD-Endostatin-RGD: A novel protein with anti-angiogenesis effect in retina via eye drops
Biochimica et Biophysica Acta      2016       (IF=5.083)

5.Jie Li et al.
Sex hormones regulate cerebral drug metabolism via brain miRNAs: down-regulation of brain CYP2D by androgens reduces the analgesic effects of tramadol
British Journal of Pharmacology      2015       (IF=5.259)

6.Pin Huan et al.
Identification of differentially expressed proteins involved in the early larval development of the Pacific oyster Crassostrea gigas
Journal of Proteomics      2012       (IF=5.074)

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