目錄:上海貝博生物科技有限公司>>氧化應激>>活性氧檢測>> BB-4605活性氧檢測試劑盒(ROS)綠色
供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T |
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貨號 | BB-4605-100T | 應用領域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè),綜合 |
探針染色工作液配制:
根據(jù)樣本數(shù)量,用HBSS將BBoxiProbe® O06熒光染料1000-2000倍稀釋,配制成探針染色工作液。
探針標記
原位標記:僅適用于貼壁培養(yǎng)細胞。
1、 培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿準備細胞樣本。
2、 待細胞生長到合適豐度,去除細胞培養(yǎng)基,用PBS洗細胞一次。
3、 加入適量體積37℃預熱的含O06探針工作液。
4、 在37℃細胞培養(yǎng)箱內(nèi)于生長狀態(tài)下避光孵育20分鐘~40分鐘(具體孵育時間需根據(jù)細胞類型而定,需預實驗優(yōu)化)。
5、 移除染色液,用PBS(pH7.4)洗滌細胞3次。以充分去除未進入細胞內(nèi)的O06探針。
6、 加入200 μL HBSS緩沖液。
7、 熒光酶標儀、熒光顯微鏡(含合適濾片)檢測。最大激發(fā)/發(fā)射波長為488 nm / 516 nm。
收集后標記:懸浮細胞或貼壁細胞消化處理
1. 離心,吸除上清培養(yǎng)基。
2. 用PBS洗細胞一次。
3. 細胞收集后重懸浮于稀釋好的37℃預熱的O06探針工作液中,細胞濃度為1*106-2*107/毫升。
4. 于生長狀態(tài)下37℃細胞培養(yǎng)箱內(nèi)避光孵育20-30分鐘(具體時間需根據(jù)細胞類型而定,需預實驗優(yōu)化)。每隔3-5分鐘顛倒混勻一下,使探針和細胞充分接觸。
5. 離心,吸除染色液,加入PBS(pH7.4)重懸細胞,洗滌3次。以充分去除未進入細胞內(nèi)的O06探針。
6. 用HBSS/PBS/無血清細胞培養(yǎng)基重懸細胞。
7. 用熒光光度計、熒光酶標儀、流式細胞儀檢測。
最大激發(fā)/發(fā)射波長為488 nm / 516 nm。
活性氧檢測:
1. 對于原位標記探針的樣品可以用熒光酶標儀檢測,或者用激光共聚焦顯微鏡、熒光顯微鏡,直接拍照分析(需要有相關的熒光強度分析軟件)。
2. 或收集細胞后標記探針然后用熒光分光光度計、熒光酶標儀或流式細胞儀檢測。
3. 對于收集細胞后標記探針的樣品可以用熒光分光光度計、熒光酶標儀或流式細胞儀檢測,用激光共聚焦顯微鏡直接拍照分析也可以(需要有相關的熒光強度分析軟件)。
4. 使用488 nm激發(fā)波長,520 nm發(fā)射波長,實時或逐時間點檢測刺激前后熒光的強弱。
探針O06的熒光光譜和FITC非常相似,可以用FITC的參數(shù)設置檢測。
5. 熒光強度強,活性氧含量高。