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一、 探針標記
原位標記：僅適用于貼壁培養細胞。
1. 按照1:1000-2000用無血清培養基稀釋O06探針。
2. 去除細胞培養基，用PBS洗細胞一次。
3. 加入適當體積稀釋好的O06探針。加入的體積以能充分蓋住細胞為宜，通常對于六孔板的一個孔加入稀釋好的O06探針不少于1毫升。
4. 在37℃細胞培養箱內避光孵育20分鐘。
5. 用無血清細胞培養液洗滌細胞三次，以充分去除未進入細胞內的O06探針。

收集后標記：懸浮細胞或貼壁細胞消化處理
1. 按照1:1000用無血清培養基稀釋O06探針。
2. 離心移除培養基，用PBS洗細胞一次。
3. 細胞收集后懸浮于稀釋好的O06探針中，細胞濃度為1*106-2*107/毫升，37℃細胞培養箱內避光孵育20分鐘。每隔3-5分鐘顛倒混勻一下，使探針和細胞充分接觸。
4. 用無血清細胞培養基洗滌細胞三次，以充分去除未進入細胞內的O06探針。
5. 用無血清細胞培養基重懸細胞。

二、 檢測：
對于原位標記探針的樣品可以用激光共聚焦顯微鏡直接觀察，或收集細胞后用熒光分光光度計、熒光酶標儀或流式細胞儀檢測。
熒光強度強，活性氧強度高。
對于收集細胞后標記探針的樣品可以用熒光分光光度計、熒光酶標儀或流式細胞儀檢測，用激光共聚焦顯微鏡直接觀察也可以。

使用488 nm激發波長，525 nm發射波長，實時或逐時間點檢測刺激前后熒光的強弱。O06探針的熒光光譜和FITC非常相似，可以用FITC的參數設置檢測。