Ti-LAPP 模塊化照明系統(tǒng)

 尼康Ti-LAPP系統(tǒng)提供全內(nèi)反射（TIRF）、光活化/轉(zhuǎn)化、光刺激與落射熒光的模塊化照明裝置。針對(duì)個(gè)性化的研究需要每一模塊都可靈活構(gòu)建專(zhuān)屬的顯微鏡系統(tǒng)。例如，多個(gè)TIRF模塊可整合到一個(gè)顯微鏡中用于不同實(shí)驗(yàn)和高速、多角度TIRF成像。配合尼康TI的分層光學(xué)結(jié)構(gòu)，一臺(tái)顯微鏡可同時(shí)搭配多達(dá)五個(gè)照明模塊（如，兩組TIRF，F(xiàn)RAP、DMD和落射熒光裝置。）

 | DMD模塊           

實(shí)現(xiàn)多點(diǎn)同時(shí)光活化

 全新DMD模塊可實(shí)現(xiàn)任意形狀任意位置的光活化或光轉(zhuǎn)化，傳統(tǒng)的FRAP組件只能進(jìn)行單點(diǎn)手動(dòng)調(diào)節(jié)的光活化。使用NIS-Elements軟件對(duì)DMD照明的形狀、大小、位置和數(shù)目進(jìn)行自由定制。研究者可利用這一技術(shù)標(biāo)記細(xì)胞群中的一部分或者單個(gè)細(xì)胞中的部分蛋白或者跟蹤多細(xì)胞的遷移。DMD模塊是光遺傳學(xué)實(shí)驗(yàn)的選擇，光遺傳技術(shù)可以借助光線改變部分細(xì)胞或蛋白功能。DMD模塊可以使用激光作為光源也可以使用更小光毒性的LED照明裝置。

小鼠胚胎纖維原細(xì)胞共轉(zhuǎn)mCherry標(biāo)記的Lamin A（紅）與左下部光轉(zhuǎn)化的光敏GFP標(biāo)記的Lamin A（綠），此轉(zhuǎn)化通過(guò)DMD模塊使用405nmLED光源進(jìn)行。時(shí)間序列圖像使用熒光照明進(jìn)行。通過(guò)光活化某一區(qū)域的Lamin蛋白，您可以觀察到局部區(qū)域的動(dòng)態(tài)變化行為。

 | H-TIRF模塊            

實(shí)現(xiàn)全自動(dòng)TIRF調(diào)節(jié)與觀察

   隨著觀察樣品與條件的不同，TIRF觀察的激光入射角度與焦點(diǎn)都有不同。調(diào)節(jié)入射角和焦點(diǎn)實(shí)現(xiàn)TIRF照明需要一定的技巧與經(jīng)驗(yàn)。全新的H-TIRF模組通過(guò)檢測(cè)反射光速自動(dòng)調(diào)節(jié)對(duì)焦與入射角。這些自動(dòng)調(diào)節(jié)動(dòng)作通過(guò)NIS-Elements軟件中的自動(dòng)準(zhǔn)直功能來(lái)完成。入射角度與漸逝區(qū)域的穿透深度可以分別保存并在不同實(shí)驗(yàn)中任意調(diào)用以滿(mǎn)足拍攝的*性。

  H-TIRF模組配備有漸變自然光強(qiáng)濾片，此濾片移入光路中可使TIRF照明變得均勻*。

  使用H-TIRF照明器與漸變ND濾片對(duì)離體制備的熒光標(biāo)記微觀（TRITC與Alexa 647）與微觀結(jié)合蛋白進(jìn)行三色成像。不同波長(zhǎng)的入射角實(shí)現(xiàn)自動(dòng)調(diào)節(jié)。

   如不使用漸變ND濾片，則TIRF的照明會(huì)在視野中呈現(xiàn)中間亮四周暗的想象。使用漸變ND濾片則可獲得均勻*的照明。

  離體制備的雙層膜結(jié)構(gòu)，使用Alexa 488(綠)同Alexa 561（紅）標(biāo)記膜蛋白并使用H-TIRF照明器進(jìn)行雙色成像（雙色TIRF）。蛋白聚集成簇并呈現(xiàn)點(diǎn)狀的結(jié)構(gòu)（上排）。

  下排顯示488通道并以彩虹方式顯示可清晰分辯左右有圖像的差異。

  H-TIRF照明器用于不同波長(zhǎng)入射焦的自動(dòng)調(diào)節(jié)。

 | FRAP模塊            

分析細(xì)胞內(nèi)蛋白動(dòng)態(tài)變化

   使用FRAP模塊，光漂白、光活化及光轉(zhuǎn)化等實(shí)驗(yàn)可以與高幀率、高林敏度相機(jī)檢測(cè)相結(jié)合。這一模塊可對(duì)目標(biāo)細(xì)胞的特定區(qū)域進(jìn)行點(diǎn)刺激，在沒(méi)有點(diǎn)掃描共焦顯微鏡的情況下提供高性?xún)r(jià)比的細(xì)胞內(nèi)蛋白動(dòng)態(tài)研究的方案。

小鼠胚胎成纖維細(xì)胞表達(dá)mCherry-lamin A，在右上角區(qū)域使用FRAP模塊進(jìn)行點(diǎn)狀光漂白并研究lamin A分子的動(dòng)態(tài)變化。時(shí)間序列圖像使用落射熒光照明。