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實驗出真知,DNA釋放劑在使用時的注意事項

閱讀:1332        發(fā)布時間:2021/3/8
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  DNA釋放劑是可以直接用新鮮的動物、植物、細菌樣品制備可以直接進行 PCR、LAMP擴增的模板
  由于試劑需要用戶自己針對不同的物品摸索用量,所以在使用時有幾下幾點注意事項
  1..未列出樣品,用戶需要自己摸索用量。對富含多醌多酚的植物材料(如棉花), 組織使用量不要超過 0.5mg。
  2. 加入 100 uL 溶液 A 工作液,確保固體樣品被溶液淹埋,如果是液體樣品則震蕩 混勻。
  3. 95℃保溫 10 分鐘。
  4. 待冷卻到常溫后加入 10uL 溶液 B 并混勻得 DNA 釋放液。這些 DNA 釋放液足夠 進行 50-100 次 PCR 或 LAMP 擴增。
  5.DNA 釋放液體積不要超過 PCR 體積的 1/10。
  6. 放入 PCR 儀中進行 PCR,PCR 參數(shù)需要根據(jù)引物 Tm 值和靶分子長度等參數(shù)設(shè) 置。一般不低于 35 次循環(huán)。
  7. PCR 結(jié)束后取 5-10 uL 直接上樣電泳(本產(chǎn)品不需要上樣液即可直接上樣),紅 色染料電泳速度相當于 50 bp DNA 片段。
  8. 如果沒有預(yù)期的擴增,細胞裂解液中可能是有 PCR 抑制劑(植物、土壤和血液等 DNA 樣品常含此類抑制物),建議把細胞裂解液分別稀釋 10 倍和 100 倍再用 3uL 進行 PCR 擴增。也可以在 PCR 體系中加入 1/10 的本公司的 PCR 抑制物清除劑。

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