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肺炎衣原體IgM檢測試劑盒的使用步驟介紹

閱讀:1850        發(fā)布時(shí)間:2022/11/4
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肺炎衣原體IgM檢測試劑盒實(shí)驗(yàn)原理:
將肺炎衣原體包被于微孔板→加入血清,使得抗原抗體結(jié)合→37℃育溫1小時(shí)→洗去未結(jié)合的抗體→加入酶結(jié)合物→37℃育溫1小時(shí)→洗去酶結(jié)合物→加入底物→加入終止液450nm→讀取吸光值→結(jié)果計(jì)算
實(shí)驗(yàn)流程:2×50ul陰性對照、1×50ul陽性對照和稀釋后的樣本加入到微孔板里→37C育溫1小時(shí)→洗液洗滌3次→加入50ulHRP酶結(jié)合物→37℃育溫1小時(shí)→洗液洗滌3次→加入100ulTMB底物→室溫平衡15分鐘→加入100ul終止液→450nm讀取吸光度→計(jì)算結(jié)果
操作步驟:
試劑準(zhǔn)備:
1.所有試劑使用前混勻并平衡至室溫。
2.洗液20倍稀釋:如50ul濃縮洗液加入950ml水。酶結(jié)合物1:300稀釋(如10ul加入300ul的稀釋液)。
3.血清樣本1:105稀釋,如加入5ul的血清,加520ul的樣本稀釋液,或者采用兩步法稀釋,加入10ul病人血清,加入200ul樣本稀釋液,取出該稀釋后的溶液25ul,再加入100ul的樣本稀釋液(陰性、陽性和標(biāo)準(zhǔn)品按以上比例稀釋)。
4.每孔加入50ul的稀釋后的液體(空白孔加入樣本稀釋液)。
5.封膜后,37℃育溫1小時(shí),拍干液體。
6.用稀釋后的洗液每孔300-350ul洗滌3次。
7.拍干后加入酶結(jié)合物的稀釋液50ul。
8.封膜后,37℃育溫1小時(shí),拍干液體。
9.重復(fù)第6步。
10.加入100ul底物,室溫放置15分鐘。
11.加入終止液100ul。
12.30分鐘內(nèi)檢測450/620nm檢測吸光度。 
檢測的有效性:
檢測結(jié)果必須符合下列條件,否則重新測試。
1.陽性對照吸光度值必須≥0.8(450nm讀取吸光度)
2.陰性對照的平均值必須0.1<NC≤0.4(450nm讀取吸光度)

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