供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 96T/盒 |
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貨號 | XK-JCH-1202 | 主要用途 | 科研 |
產(chǎn)品簡介
詳細介紹
產(chǎn)品介紹
西尼羅病毒(WN)IgG抗體ELISA檢測試劑盒
僅供科研使用
用途
西尼羅(WN)病毒IgG ELISA,利用了西尼羅重組抗原檢測人體血清或血漿中的西尼羅抗體。本實驗僅用于輔助診斷人感染了西尼羅病毒,不用于篩查血液或血液成分。僅供專業(yè)人員體外診斷使用。
概述
感染了西尼羅病毒會導(dǎo)致包括腦炎等一系列癥狀的疾病,西尼羅病毒在世界廣泛傳播,已在50多個國家檢測出該病毒。本試驗經(jīng)CDC提供的試劑檢驗與驗證。本試驗使用了一種稱為WNRA的重組抗原,它可以作為西尼羅病毒感染的快速血清學(xué)指標,WNRA蛋白是一種重組抗原,它是由含有西尼羅病毒兩個抗原的序列多肽構(gòu)成。
實驗的原理
檢測西尼羅病毒IgG ELISA 是基于兩步夾心法原理制造的。
提供的材料
1. 微孔板(96孔 12x8):即用 每孔均包被結(jié)合西尼羅重組抗原的單抗。2-8℃下保存至保質(zhì)期。
注意:WNRA和NCA已包被于微孔板。
2. IgG樣品稀釋液:1支 25ml 即用 2-8℃下保存至使用。
3. IgG陰性質(zhì)控:1支 30ul 2-8℃下保存至使用。要長時間儲存,將其分裝于小瓶里,在-70℃下儲存。
4. IgG陽性質(zhì)控:1支 30ul 2-8℃下保存至使用。要長時間儲存,將其分裝于小瓶里,在-70℃下儲存。
5. 洗滌液(10X):1瓶 120ml 2-8℃下保存至使用。
6. EnWash:1瓶 20ml 2-8℃下保存至使用。
7. 酶聯(lián)物:一瓶6ml 即用 2-8℃下保存至使用。
8. TMB底物液: 1支 9ml 即用 2-8℃下保存至使用。
9. 終止液;1支6ml 即用 2-8℃下保存至使用。
人類免疫缺陷病毒抗體診斷試劑盒 |
基孔肯雅熱病毒IgM抗體檢測試劑盒 |
甲基安非他檢測試劑盒 |
試劑應(yīng)避免反復(fù)凍融。
操作步驟
在使用前將所有試劑和樣品平衡至室溫,并輕輕倒轉(zhuǎn)使其充分混勻。
實驗準備:
將10X的濃縮洗滌液稀釋,將120ml的濃縮洗滌液加上1080ml的蒸餾水,搖勻,至無任何沉淀,稀釋好的洗滌液多可在室溫下放置兩個星期。
準備實驗所需的板條,剩余的板條應(yīng)盡快放入袋子里重新密封,在2-8℃下儲存至保質(zhì)期。
操作步驟:
1. 標記將要使用的板條,注意微孔板已經(jīng)按照統(tǒng)一排列,如下所述包被西尼羅抗原和質(zhì)控抗原。
西尼羅抗原 |
| |
板條#1 | 板條#2 | |
A | WNRA | WNRA |
B | WNRA | WNRA |
C | WNRA | WNRA |
D | WNRA | WNRA |
E | NCA | NCA |
F | NCA | NCA |
G | NCA | NCA |
H | NCA | NCA |
2. 將血清樣品﹑陰性質(zhì)控和陽性質(zhì)控同樣地用樣品稀釋液按1:300稀釋。
3. 每孔加入50ul稀釋后的樣品,以下為一個血清樣品使用一個板條的*。
| 板條1 | 板條2 | |
血清樣品 | |||
A | IgG N | 樣品1 | |
B | IgG N | 樣品1 | |
C | IgG P | 樣品2 | |
D | IgG P | 樣品2 | |
E | IgG P | 樣品2 | |
F | IgG P | 樣品2 | |
G | IgG N | 樣品1 | |
H | IgG N | 樣品1 | |
4. 封板,在濕潤的溫育器里37℃下溫育1小時。
5. 溫育后,用自動洗板機,使用洗滌液洗板6次。
6. 在每孔中加入50ul的酶聯(lián)物。
7. 封板,在濕潤的溫育器里37℃下溫育1小時。
8. 溫育后,用自動洗板機,使用洗滌液洗板6次。
9. 每孔加入150ul的EnWash,在室溫下溫育5分鐘
10. 溫育后,用自動洗板機,使用洗滌液洗板6次。
11. 每孔加入75ul的TMB底物液。
12. 封板,在室溫下,避光處溫育10分鐘。
13. 每孔加入50ul的終止液終止反應(yīng)。
14. 在450nm處讀取吸光率。
結(jié)果的計算
結(jié)果的變化將會非常大,以下結(jié)果僅供指引。
計算ISR值:
計算在同一實驗里WNR抗原的兩個陰性質(zhì)控的平均值,計算同一實驗里NC抗原的兩個陰性質(zhì)控的平均值,用WNRA/NCA,得出陰性質(zhì)控的ISR值。同樣地計算陽性質(zhì)控和樣品得ISR值,陽性質(zhì)控的ISR值應(yīng)高于3.0,陰性質(zhì)控的ISR值應(yīng)低于1.5。
ISR | 結(jié)果 | 解釋 |
≤2.0 | 陰性 | 沒有檢測到IgG抗體 |
2.0-3.0 | 可疑 | 需確證實驗 |
≥3.0 | 陽性 | 存在IgG抗體,建議做確定性實驗 |
結(jié)果的判斷:
在某些特殊的例子中,曾報道有假陽性,但對梅毒病人無限制。假如樣品的ISR值大于2.0,但是WNRA和NCA的OD值均偏低,可視為潛在假陽性。以下為樣品1排除標準的范例。
排除標準:
計算陰性質(zhì)控的WNRA和NCA值:
| WNRA | NCA |
1 | 0.153 | 0.126 |
2 | 0.125 | 0.110 |
總計 | 0.260 | 0.236 |
平均WNRA=0.260/2=0.130
NCA=0.236/2=0.118
ISR=0.130/0.118=1.10
任何陰性質(zhì)控的ISR值高于1.5,則實驗需要重做。
計算陽性質(zhì)控的WNRA和NCA值:
| WNRA | NCA |
1 | 0.635 | 0.190 |
NO. 2 | 0.655 | 0.178 |
總計 | 1.290 | 0.368 |
平均WNRA=1.290/2=0.645
NCA=0.368/2=0.184
ISR=0.645/0.184=3.5
任何陽性質(zhì)控的ISR值低于3.0,則實驗需要重做。
以下標準是必需遵守的,不滿足以下標準,試劑出現(xiàn)了質(zhì)量問題或操作錯誤,實驗需重做。
因素 | 范圍 |
平均陰性質(zhì)控讀數(shù) | <0.400 |
平均陽性質(zhì)控讀數(shù) | >0.400 |
陽性質(zhì)控的ISR值 | >3.000 |
陰性質(zhì)控的ISR值 | <1.500 |
解釋結(jié)果
1. 樣品的ISR值大于3.0視為陽性。
2. 陽性結(jié)果需重做證明。
3. 樣品的ISR值小于2.0視為陰性。
4. 樣品的ISR值小于3.0但是大于2.0,視為未確定,但是很有可能陽性,實驗需一式三份重做。
5. ISR值大于2.0是因為WNRA和NCA的值都低造成的,應(yīng)該視為潛在假陽性。
樣品1低OD值的范例:
計算樣品的WNRA和NCA值:
| WNRA | NCA |
1 | 0.044 | 0.190 |
NO. 2 | 0.016 | 0.007 |
總計 | 0.060 | 0.026 |
平均WNRA=0.060/2=0.030
NCA=0.026/2=0.013
ISR=0.030/0.013=2.31
雖然樣品的ISR值高于2.0,但是本樣品需視為假陽性,因為其OD值低,而且遠遠偏離了相關(guān)的標準品,這通常在空白值高的情況下發(fā)生。
要進一步證實樣品,所有陽性的結(jié)果都要用6,2層析稀釋滴定法重做,與相同滴定法的陰性質(zhì)控相比較,假如曲線是??的,平的或者是波浪型的曲線,則表明為假陽性的結(jié)果。
實驗的局限性
1. 樣品的OD值高于抗原質(zhì)控(非WNRA),導(dǎo)致ISR值小于3.0,則可能為假陰性,再釋稀樣品重新實驗,可能會獲得真正的ISR值。
2. 既然這不是一個直接檢測的方法,則需考慮假陽性和假陰性存在的可能性。
3. 所有有反應(yīng)的樣品,應(yīng)用確定性實驗來證實。
4. 本實驗提供的試劑,盡可能地檢測血清或血漿中的WNRA反應(yīng)性抗體水平。
5. 應(yīng)避免反復(fù)凍融樣品和試劑。
6. 不要使用溶血或脂血的樣品,它們會導(dǎo)致錯誤的結(jié)果。
本譯文僅供參考,詳情請以原文為準
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