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(今日/更新)伯樂PCR儀售后維修-BioRad訪問

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更新時間:2022-09-27 23:47:31瀏覽次數:146

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產品簡介

產地類別 進口 應用領域 綜合
中國.伯樂.Bio-Radpcr儀售后維修中心:
全國24h服務熱線: 020-8568.1121
急修熱線: 183.2073.5336

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Bio-Rad-PCR儀 - 技術原理;

DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈,在DNA聚合酶與啟動子的參與下,根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。在聚合酶鏈式反應實驗中發現,DNA在高溫時也可以發生變性解鏈,當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復性,并設計引物做啟動子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。但是,DNA聚合酶在高溫時會失活,因此,每次循環都得加入新的DNA聚合酶,不僅操作煩瑣,而且價格昂貴,制約了PCR技術的應用和發展。發現耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環加酶,使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,PCR技術得以大量應用,并逐步應用于臨床。


1)內參照法:在不同的PCR反應管中加入已定量的內標和引物,內標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記,下游引物不標記。在模板擴增的同時,內標也被擴增。在PCR產物中,由于內標與靶模板的長度不同,二者的擴增產物可用電泳或高 效液相分離開來,分別測定其熒光強度,以內標為對照定量待檢測模板。

2)競爭法:選擇由突變克隆產生的含有一個新內切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中,待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增(其中一個引物為熒光標記)。擴增后用內切酶消化PCR產物,競爭性模板的產物被酶解為兩個片段,而待測模板不被酶切,可通過電泳或高 效液相將兩種產物分開,分別測定熒光強度,根據已知模板推測未知模板的起始拷貝數。

3)PCR-ELISA法:利用或等標記引物,擴增產物被固相板上特異的探針所結合,再加入抗或酶標抗體-辣根酶結合物,最終酶使底物顯色。常規的PCR-ELISA法只是定性實驗,若加入內標,作出標準曲線,也可實現定量檢測目的。


Bio-Rad-內標在傳統定量中的作用;

由于傳統定量方法都是終點檢測,即PCR到達平臺期后進行檢測,而PCR經過對數期擴增到達平臺期時,檢測重現性極差。同一個模板在96孔PCR儀上做96次重復實驗,所得結果有很大差異,因此無法直接從終點產物量推算出起始模板量。加入內標后,可部分消除終產物定量所造成的不準確性。但即使如此,傳統的定量方法也都只能算作半定量、粗略定量的方法。


制備和操作用于核酸提取的試劑時應該采取預防措施:

⑴PCR產物和帶有要擴增序列的DNA克隆不能在這個房間操作。

⑵組織培養物、組織標本和血清樣品都帶進樣品準備間處理,以根據應用的需要提取DNA或RNA。

⑶用于樣品處理的工具不能被用作普通分子克隆的工具,也不能用作操作靶序列。

⑷DNA樣品應該用有專門的防護或正壓活塞式移液管操作,以防止在吸取樣品時有氣溶膠遺留。

⑸大體積樣品應該用單獨包裝的無菌一次性移液管吸取。

⑹管子打開前都要簡短離心以減少氣溶膠的產生,而且管子不能用力崩開,這樣會產生氣溶膠。

⑺任何時候都應該穿實驗服和帶手套,手套要經常更換,尤其在抽提過程中每一步之間都要更換。實驗服要專門用于樣品準備間,經常清洗。


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