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中國(guó).伯樂(lè).Bio-Rad酶標(biāo)儀售后維修中心:
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Bio-Rad酶標(biāo)儀熒光分析技術(shù)是一種強(qiáng)大的分析手段,廣泛地應(yīng)用在臨床檢驗(yàn)、生物學(xué)研究、農(nóng)業(yè)科學(xué)、食品和環(huán)境科學(xué)中,是多功能酶標(biāo)儀的重要應(yīng)用,如TECAN(M1000、M200等),Thmeral(Varioskan Flash),Bio-tek(Synergy 4等),MD(M2、M5)都可以應(yīng)用于熒光檢測(cè)。
Bio-Rad酶標(biāo)儀概述;
室溫下,大多數(shù)分子處于基態(tài)的振動(dòng)能級(jí),處于基態(tài)的分子吸收能量(光能、化學(xué)能、電能或熱能)后躍遷至激發(fā)態(tài),激發(fā)態(tài)不穩(wěn)定,將很快衰變到基態(tài),以光的形式放出能量,這種現(xiàn)象稱為“發(fā)光現(xiàn)象"。分子發(fā)光包括熒光,磷光,化學(xué)發(fā)光,生物發(fā)光等。受到光照時(shí)發(fā)光,光照切斷時(shí)發(fā)光立即消失的叫熒光,光照切斷時(shí),發(fā)光逐漸變?nèi)跻灾孪У慕辛坠猓栈瘜W(xué)反應(yīng)的化學(xué)能量而發(fā)光叫化學(xué)發(fā)光,由生物能轉(zhuǎn)變?yōu)楣廨椛涞姆Q作生物發(fā)光。
由于發(fā)光物質(zhì)不同熒光有分子熒光和原子熒光之分,分子熒光為帶光譜,原子熒光為線光譜,通常所說(shuō)的熒光為分子熒光。通過(guò)測(cè)定所發(fā)射熒光的特性和強(qiáng)度,可以對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定性、定量分析。
Bio-Rad酶標(biāo)儀熒光檢測(cè)技術(shù);
1熒光強(qiáng)度
熒光強(qiáng)度與熒光物質(zhì)的濃度成正比,這是熒光分析法是量分析的依據(jù)。在生物學(xué)上的應(yīng)用非常廣泛,可以進(jìn)行生物大分子定量,酶活性分析,熒光免疫分析,細(xì)胞學(xué)分析(細(xì)胞增殖,細(xì)胞毒理,細(xì)胞吸附等)和分子間相互作用。
1.1細(xì)胞凋亡檢測(cè)
Caspase家族在介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的過(guò)程中起著非常重要的作用,其中Caspase-3為關(guān)鍵的執(zhí)行分子,它在凋亡信號(hào)傳導(dǎo)的許多途徑中發(fā)揮功能。Caspase-3正常以酶原(32KD)的形式存在于胞漿中,在凋亡的早期階段,它被激活,活化的Caspase-3由兩個(gè)大亞基(17KD)和兩個(gè)小 亞基(12KD)組成,裂解相應(yīng)的胞漿胞核底物,最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。但在細(xì)胞凋亡的晚期和死亡細(xì)胞,caspase-3的活性明顯下降。
設(shè)計(jì)出熒光物質(zhì)偶聯(lián)的短肽Z-DEVD-AMC。在共價(jià)偶聯(lián)時(shí),AMC不能被激發(fā)熒光,短肽被水解后釋放出AMC,自由的AMC才能被激發(fā)發(fā)射熒光。根據(jù)釋放的AMC熒光強(qiáng)度的大小,可以測(cè)定 caspase-3的活性,從而反映Caspase-3被活化的程度。
1.2細(xì)胞毒性的檢測(cè)
體外細(xì)胞毒性研究對(duì)于檢測(cè)新的生物來(lái)源或人工合成的細(xì)胞毒素以及例行的臨床相關(guān)的檢測(cè)都有著重要的意義。細(xì)胞膜非滲透性的核染料 Propidium iodide能穿透損傷的細(xì)胞膜,熒光密度越高反映出其受損細(xì)胞越多。
1.3鈣流檢測(cè)
Fura-2、indo-1、Quin-2是Ca2+熒光指示劑,可以靈敏地反映細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的變化,當(dāng)結(jié)合鈣離子時(shí),最大激發(fā)波長(zhǎng)會(huì)發(fā)生改變,發(fā)射熒光的強(qiáng)度和結(jié)合的Ca2+濃度有著定量的關(guān)系。
2.熒光偏振(FP)
1926年P(guān)errin首先描述了熒光偏振理論,溶液中的熒光分子在受到偏振光照射時(shí),可吸收并釋放出相應(yīng)的偏振熒光,如果在激發(fā)時(shí)熒光物質(zhì)處于靜止?fàn)顟B(tài),發(fā)射光將保持原有激發(fā)光的偏振性,如果其處于運(yùn)動(dòng)狀態(tài),發(fā)射光電偏振偏振平面將不同于原有激發(fā)光的偏振特性,這就是熒光偏振現(xiàn)象,熒光分子與其它因子的相互作用,例如相互結(jié)合或排斥;其所處環(huán)境的性質(zhì),例如溶液的粘度、溫度等,這些因素都有可能對(duì)這個(gè)熒光因子受激發(fā)后發(fā)出的發(fā)射光的發(fā)射平面產(chǎn)生影響。因此以熒光偏振為基礎(chǔ)發(fā)展的技術(shù)可用來(lái)研究生命科學(xué)中分子之間的相互作用,如受體配體結(jié)合分析,DNA-蛋白質(zhì)結(jié)合分析,SNP分析,酶活性分析。熒光偏振分析所需的樣品量少,靈敏度高,可達(dá)亞納摩爾級(jí)范圍,重復(fù)性好,操作簡(jiǎn)便,也更為安全可靠,不會(huì)在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中生成有害的放射性廢物,此外熒光偏振是真正均相的,允許實(shí)時(shí)檢測(cè)(動(dòng)力學(xué)檢測(cè)),對(duì)于濃度變化不敏感,是均相檢測(cè)形式(中間不含洗滌步驟)的解決方案。