食品中folic acid 葉酸免疫親和柱 IAC-SEP

IAC-SEP®葉酸免疫親和柱

                            （產品編號：IAC322）   

原理

葉酸免疫親和柱能夠特異性的純化樣品中的葉酸，將樣品與提取液混合、提取、過濾，然后將濾液通過免疫親和柱。此時，葉酸物質鍵合在親和柱中的抗體上。用蒸餾水將免疫親合柱上的雜質除去。用洗脫液通過分離柱，將葉酸從抗體上分離下來。后，將洗脫液注入HPLC或LC-MS進行測定。

儲存條件

該親和柱保存在2-8 °C條件下，不能冷凍，保質期為18個月。建議在室溫（18-30°C）下使用。

實驗溶液制備

        pH7.4 PBS溶液：8.0 克NaCl + 2.90克Na2HPO4 12H2O + 0.24 克 KH2PO4 + 0.2克KCl  加990mL純水溶解，加純水至1升。

     10%抗壞血酸鈉：稱取10g L-抗壞血酸鈉100mL容量瓶中，加水溶解混勻。

      洗脫液（30%乙腈+0.2%三fu乙酸）: 準確量取30mL乙腈加入到100mL容量瓶中，然后再加入0.2mL 三fu乙酸，后用純水定容至100mL。

所需其他試劑：胰酶（sigma P1750）

液相色譜條件

色譜柱： Agilent-C18,4.6×150mm（5um）

流動相：0.1%三fu乙酸：乙腈=85:15（v/v）

流速：0.5 mL/min

檢測器：紫外檢測器，280nm

進樣體積：50uL

分析步驟

1） 樣品提取及稀釋：

嬰兒配方食品、嬰兒即食食品、牛奶、奶粉、谷物、能量棒等樣品的操作步驟：稱取 1-10g樣品（根據需要的檢測范圍確定稱量多少），置于250 mL錐形瓶中。將50mL pH7.4 PBS溶液加入到錐形瓶中，混勻。加入4g 胰酶，搖床震蕩10分鐘。加入6mL 10%抗壞血酸鈉，搖床震蕩5分鐘。將錐形瓶置于37℃的水浴搖床震蕩2 h。然后將錐形瓶置于100℃的水浴中靜置20min。取出錐形瓶冷卻至室溫；用pH7.4 PBS溶液定容至100mL，搖勻。將提取液4000 RPM離心10 min。準確移取吸取上層液10 mL，備用。

2） 樣品的凈化

   葉酸免疫親和柱的柱容量(吸附葉酸)為450ng，當樣品中葉酸超過測定范圍時，請適當減小上柱體積，使其在檢測范圍內，計算出準確含量。

食品中folic acid 葉酸免疫親和柱 IAC-SEP