一、細胞基本屬性
細胞名稱 :人前列腺癌細胞
細胞別稱 : C4-2; LNCaP-C4-2; LNCaP subline C4-2; C4-2; C42; Sp 2817
細胞貨號 :SNL-160
細胞種屬 :人
生長情況 :貼壁
培養條件 :1640+10%FBS+1%雙抗
培養環境 :air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%
二、細胞培養操作
換液周期 :2-3天
培養基體積 :T25瓶10-12ml;10cm皿12-15ml
傳代比例 :1:2-1:4(具體情況視細胞生長速度及密度決定)
傳代方法 :
1.盡量吸干凈T25瓶原培養基;
2.加3-4ml 常溫PBS輕輕潤洗細胞10-20s,吸走潤洗的PBS;
3.T25瓶加1ml左右胰m,輕輕晃動培養瓶以使胰m鋪勻瓶底細胞層;
4.將培養瓶放入37度培養箱消化;
5.消化到細胞間隙變大,但未*脫落時加2-3ml*培養基終止胰m消化;
6.混勻細胞,900rpm離心3-5min,棄上清;
7.加新的*培養基輕輕重懸細胞,均勻分到新的培養瓶里;
8.補足*培養基,將培養瓶放回培養箱靜置培養;
注意事項 :不同品牌胰m消化時間差別較大,注意嚴格控制消化時間
消化傳代細胞時吹打細胞注意盡量輕柔,不要產生過多氣泡以免影響細胞狀態。
三、細胞凍存操作
凍存液配方 92%FBS+8%DMSO(新手推薦)或92%*培養基+8%DMSO(高手推薦);
凍存規格 200-300萬/ml,1ml每管
凍存方法 :
1.消化并離心獲得細胞沉淀后,加配置好的凍存液輕輕重懸細胞;
2.將細胞懸液盡快移入已經做好標記的凍存管;
3.將凍存管轉入程序凍存盒,放入-80度冰箱過夜,第二天轉入液氮保存;沒有程序凍存盒的實驗室,加入細胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min,再-20度靜置2h后轉入-80度過夜,第二天轉入液氮保存
注意事項 :凍存細胞轉入液氮后及時復蘇一管檢查細胞凍存活性,若有異常,及時調整實驗方案
Tips:
1.細胞貼壁較弱,消化時間偏短,注意控制消化時間;
2.T25瓶細胞發貨易漂浮成團,收貨若成團按收貨處理規定進行;
3.細胞培養時可能會有部分黑點,屬正常現象,具體原因參見培養操作說明2、3條;
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