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一、細(xì)胞基本屬性
細(xì)胞名稱:Colo-320（人結(jié)腸腺癌細(xì)胞）
細(xì)胞別稱:Colo-320
細(xì)胞貨號(hào):SNL-128
細(xì)胞種屬:人
生長(zhǎng)情況：半貼壁
培養(yǎng)條件：1640+10%FBS+1%雙抗
培養(yǎng)環(huán)境：air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%
二、細(xì)胞培養(yǎng)操作
換液周期;2-3天
培養(yǎng)基體積:T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml
傳代比例:1:2-1:4（具體情況視細(xì)胞生長(zhǎng)速度及密度決定）
傳代方法:
1.輕輕吸走培養(yǎng)上清，留2-3ml培養(yǎng)基輕輕吹打細(xì)胞面吹下細(xì)胞；
2.混勻細(xì)胞，收集細(xì)胞培養(yǎng)基，900rpm離心3-5min，棄上清；
3.加新的*培養(yǎng)基輕輕重懸細(xì)胞，均勻分到新的培養(yǎng)瓶里；
4.補(bǔ)足*培養(yǎng)基，將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)；
注意事項(xiàng):半貼壁細(xì)胞會(huì)附著瓶底，但貼壁不緊，輕輕吸取培養(yǎng)基輕輕吹打細(xì)胞面就會(huì)脫落，不需要胰m消化。建議使用培養(yǎng)皿培養(yǎng)，更適合吹打細(xì)胞操作，吹打細(xì)胞注意盡量輕柔，不要產(chǎn)生過(guò)多氣泡以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
三、細(xì)胞凍存操作
凍存液配方:92%FBS+8%DMSO(新手推薦)或92%*培養(yǎng)基+8%DMSO(高手推薦);
凍存規(guī)格:200-300萬(wàn)/ml，1ml每管
凍存方:
1.消化并離心獲得細(xì)胞沉淀后，加配置好的凍存液輕輕重懸細(xì)胞；
2.將細(xì)胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標(biāo)記的凍存管；
3.將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒，放入-80度冰箱過(guò)夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存；沒(méi)有程序凍存盒的實(shí)驗(yàn)室，加入細(xì)胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過(guò)夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存
注意事項(xiàng):凍存細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮后及時(shí)復(fù)蘇一管檢查細(xì)胞凍存活性，若有異常，及時(shí)調(diào)整實(shí)驗(yàn)方案

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