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武漢原生原代生物醫藥科技有限公司

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LLC+luc小鼠肺癌細胞熒光素酶標記

參  考  價: 3000

訂  貨  量: ≥1 瓶

具體成交價以合同協議為準

產品型號:

品       牌:PriCells/原生原代

廠商性質:生產商

所  在  地:武漢市

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更新時間:2021-10-27 09:33:56瀏覽次數:587次

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供貨周期 一周 規格 1 × 10^6 細胞數/1ml
應用領域 醫療衛生,化工,生物產業 主要用途 科研
LLC+luc小鼠肺癌細胞熒光素酶標記描述
Lewis肺癌是一種從C57BL小鼠的肺中建立的細胞系,該細胞帶有原發性Lewis肺癌的植入所致的腫瘤,被廣泛用作轉移的模型,可用于研究癌癥化學治療劑的機制。該細胞通過慢病毒轉染的方式攜帶Luc基因。

LLC+luc小鼠肺癌細胞熒光素酶標記

細胞描述

Lewis肺癌是一種從C57BL小鼠的肺中建立的細胞系,該細胞帶有原發性Lewis肺癌的植入所致的腫瘤,被廣泛用作轉移的模型,可用于研究癌癥化學治療劑的機制。該細胞通過慢病毒轉染的方式攜帶Luc基因。


細胞特性

來源:小鼠肺癌組織

形態:半貼壁生長,混合形態,有上皮細胞樣,松散貼壁或懸浮有梭形、圓形等細胞形態 。

含量:含量:>1x10^6  細胞數

規格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

用途:僅供科研使用。


LLC+luc小鼠肺癌細胞熒光素酶標記

運輸和保存

干冰運輸及復蘇好存活細胞

(1)1mL凍存管包裝干冰運輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇,若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯系。

(2)T25瓶復蘇的存活細胞常溫發貨,收到后按照細胞接收后的處理方法操作。


細胞接收后的處理

1)收到細胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置約2-3h,若發現培養瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時聯系我們。

2)請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態,同時給剛收到的細胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養瓶外觀照片一張留存,作為售后時收到時細胞狀態的依據。

3)半貼細胞和貼壁不牢(懸浮)細胞:T25瓶置于37℃培養箱中約2-3h,顯微鏡下觀察細胞的情況,若細胞密度在60%以下,客戶需收集T25瓶中的懸浮細胞離心后用*培養基重懸后打回到原培養瓶中繼續培養,若細胞生長70%-90%對細胞進行傳代,傳代時需要收集培養基中懸浮的細胞離心后回收。

4)備注:運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞,請換用按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基來培養細胞。  收到細胞后第一次傳代建議T25培養瓶1:2傳代 。


一.培養基及培養凍存條件準備

1)準備DMEM(推薦0001)培養基;優質胎牛血清,10%;雙抗,1%

注意:此細胞貼壁不牢,生長前期懸浮細胞較多,后期貼壁細胞較多,建議傳代和換液時回收培養基中懸浮的細胞。

2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。

3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配。


二. 細胞處理:

1)凍存細胞的復蘇:

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL*培養基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,*培養基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml*培養基的培養瓶(或皿)中37℃培養過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。


2) 細胞傳代:如果細胞密度達70%-90%,即可進行傳代培養。

該細胞為輕微貼壁和懸浮培養的細胞,傳代可以參考以下方法:

1. 收集:將培養瓶中的懸浮的細胞收集到離心管中。用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。由于細胞貼壁不牢PBS潤洗后細胞會脫落所以PBS也要回收到離心管中。

2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL)置于37℃培養箱中消化1-2分鐘(難消化的細胞可以適當延長消化時間),然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養基來終止消化。

3. 將收集到的懸浮細胞、pbs清洗液中的細胞和消化下來的貼壁細胞以1000rpml離心5min,棄去上清,補加1-2mL培養液后重懸混勻后將細胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的*培養基以保持細胞的生長活力,后續傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。


3) 細胞凍存: 收到細胞后建議在培養前3代時凍存一批細胞種子以備后續實驗使用。

下面T25瓶為例;

1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中,可使用血球計數板計數,來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個活細胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ,按每1ml凍存液含1×106~1×107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中,標注好名稱、代數、日期等信息。

3. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續查閱和使用。

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