CHO-S倉鼠卵巢細胞

細胞介紹
貼壁生長及懸浮生長均可（用于蛋白表達時，應使用懸浮生長狀態，此時細胞生長狀態更好，比表面積更高，生物反應器中的傳質、傳熱效率更高，同時也可提高生物反應器空間使用效率。工業上大規模生產單抗，重組蛋白，大部分使用懸浮培養法來生產）

細胞特性
1）來源：中國倉鼠
2）形態：成纖維細胞樣
3）含量：>1x10^6 個/mL
4）污染：支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5）規格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

CHO-S倉鼠卵巢細胞

運輸和保存

可選擇干冰運輸及發送復蘇存活細胞方式

（1）干冰運輸，收到后立即轉入液氮凍存或直接復蘇；

（2）存活細胞，收到后應繼續生長，傳代達到細胞生長狀態良好時，再進行凍存。

（3）具體操作見細胞培養步驟。

細胞用途：僅供科研使用。
                       
細胞培養步驟
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）培養基信息：EX-CELL CD-CHO CHO Serum-free Medium,Chemically Defined(Sigma-Aldrich,貨號：24361C) 
添加物：
L-谷氨酰胺（Sigma-Aldrich,貨號：G8540-25G）
Anti-Clumping Agent(Gibco，貨號：01-0057AE)
備注：CD-CHO CHO Serum-free Medium請按照培養基配制說明書配制，L-谷氨酰胺配制濃度為200mM，工作濃度為8mM（即稀釋25倍，如500ml CHO Serum-free Medium 中添加20ml 200mM L-谷氨酰胺，抗結團劑使用為1%，即500ml CHO Serum-free Medium 中添加5ml 抗結團劑）
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%*培養基，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。

二．細胞處理：
傳代、轉染、建庫及實驗室規模小試方法：
賽百慷提供的CHO-S細胞為已馴化的細胞，具有良好的適應懸浮生長及適應無血清培養基生長特性。

傳代方法：
1.10cm皿中培養：使用計數器（計數器或者血球計數板計數）計數，接種密度為3×105個細胞/ml接種于提前37℃預熱的新鮮培養基中（建議培養基取7-8ml，此時細胞生長狀態較好），置于搖床上生長，轉速為120-130rpm，濕度為70-80%，5%二氧化碳，溫度為37℃。
2.培養約2-3天，細胞密度達到1×106個活細胞/ml時，應1000rpm，25℃離心5min，離心后計數（此時應稀釋），然后接種密度為3×105個細胞/ml接種于提前37℃預熱的新鮮培養基中。細胞數目足夠時，可凍存。
也可選擇125ml或者250ml搖瓶中培養細胞。（注意細胞培養液體積一般在總體積的五分之一，如在125ml搖瓶中加入25ml培養物，應注意在搖瓶中培養細胞時應將瓶蓋稍微擰松，以便于氣體交換，同時也不宜擰得過松，防止細胞污染）

轉染方法：
在連續5代細胞密度未超過2×106個活細胞/ml時，可以使用FreeStyle Max轉染試劑（Gibco，貨號：16447）在CD CHO Serum-free Medium中直接轉染。（注意：Anti-Clumping Agent會干擾FreeStyle Max轉染試劑轉染效率，同時也會干擾其他脂質體型轉染試劑的轉染效率）

建庫方法：
若需要建庫，可將細胞接種于125ml搖瓶中（接種密度為3×105個細胞/ml，總體積為25ml），此方法同樣適用于穩定表達所需要蛋白的細胞株的建庫工作。建庫時，需要先建初級庫（master bank）（一般為10支，每支細胞總數不少于4.5×107個細胞），此步驟結束后，從凍存的初級庫中取出一支復蘇，按照同樣步驟建次級庫（working bank）（相同的，一般為10支，每支細胞總數不少于4.5×107個細胞）。

實驗室規模小試方法：
將挑選出的穩定細胞株從96孔板到24孔板到6孔板到10cm皿中逐級擴大培養后（此時需要注意在培養過程中應及時保種，以防止后續步驟出現污染，及應對可能的表達量衰退現象）以3×105個細胞/ml接種于125ml搖瓶中，轉速為120-130rpm，溫度為37℃，濕度為70-80%，連續培養一周，每天取樣做出相應的細胞生長曲線，細胞活率曲線，蛋白表達曲線，可根據實際情況，每天取樣測出培養基中葡萄糖含量，以便決定是否需要補加葡萄糖，同時可使用CHO Feed Bioreactor Supplement作為細胞發酵中補料，同時做出相應的細胞生長曲線，細胞活率曲線，蛋白表達曲線，為中試放大補料添加做出合理數據支持。