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如何正確操作使用蛋白純化填料?

閱讀:581      發(fā)布時(shí)間:2023-6-26
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  蛋白質(zhì)是細(xì)胞的重要組成部分,對(duì)維持生命活動(dòng)起著至關(guān)重要的作用。為了進(jìn)一步對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行研究和利用,需要對(duì)其進(jìn)行純化,純化是從混合樣品中分離出目標(biāo)蛋白質(zhì)的過(guò)程。而蛋白純化填料作為純化過(guò)程中*重要組成部分,起著至關(guān)重要的作用,主要是是指用于吸附和分離蛋白質(zhì)的固相填料,通常包括離子交換樹(shù)脂、親和層析樹(shù)脂、凝膠過(guò)濾材料等。其中,離子交換樹(shù)脂和親和層析樹(shù)脂是目前應(yīng)用廣泛的純化填料。
 
  離子交換樹(shù)脂是指具有陰、陽(yáng)離子交換基團(tuán)的樹(shù)脂,可以根據(jù)蛋白質(zhì)表面所帶的電荷性質(zhì),選擇相應(yīng)的陰、陽(yáng)離子交換樹(shù)脂進(jìn)行選擇性吸附和分離。離子交換樹(shù)脂操作簡(jiǎn)單、效率高、適用范圍廣,但可能會(huì)造成蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)損傷和純化效果不理想等問(wèn)題。
 
  親和層析樹(shù)脂則是根據(jù)蛋白質(zhì)的特異性結(jié)合性,通過(guò)選用匹配的親和劑進(jìn)行選擇性吸附和分離。比如,親和層析樹(shù)脂可以利用抗體來(lái)選擇性吸附和純化所需的蛋白質(zhì),也可以利用金屬離子和His標(biāo)記來(lái)選擇性吸附和純化蛋白質(zhì)。親和層析樹(shù)脂具有選擇性強(qiáng)、結(jié)構(gòu)損失小等優(yōu)點(diǎn),但成本較高。
 
  除此之外,還有凝膠過(guò)濾材料,其通過(guò)蛋白質(zhì)在凝膠孔洞中的分子大小、形狀等性質(zhì)的差異進(jìn)行選擇性純化。凝膠過(guò)濾材料可根據(jù)自身需要進(jìn)行不同孔徑的填充,由于對(duì)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)影響小,因此也被廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)純化中。
 
  蛋白純化填料使用時(shí)需注意:
 
  1.定期更換緩沖液:選擇合適的緩沖液和保護(hù)劑,定期更換。
 
  2.定期清洗填料:采用PH調(diào)節(jié)、超聲波、化學(xué)法等方法,去除阻塞物和雜質(zhì)。
 
  3.避免高溫、干燥:避免填料暴曬于陽(yáng)光下,避免高溫、干燥造成填料的老化和破壞。
 
  4.避免受力過(guò)大:避免填料受到過(guò)大的擠壓和撞擊。
 
  5.定期檢查:定期檢查填料的狀態(tài)和性能,避免使用失效或損壞的填料。

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