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　　人臍靜脈內皮細胞均來自新鮮組織，用于培養該細胞的組織采集是根據標準方案進行。
 

　　人臍靜脈內皮細胞的培養方法：
 

　　一、材料與設備
 

　　1.設備超凈工作臺、離心機、水浴鍋、CO2培養箱、-10℃冰箱、-20℃冰箱。
 

　　2.無菌材料大培養皿、止血鉗、靜脈插管、500ml大燒杯、消毒的蒸餾水、50ml離心管、刻度吸管、彎頭吸管、T25培養瓶、廣口試劑瓶、臍帶(1根)、保鮮液(0.01%EDTA/DMEM,4℃儲藏)、高糖DMEM培養液、胎牛血清、青/鏈霉素、D-Hanks溶液、I型膠原酶、VEGF或ECGS。
 

　　二、操作流程
 

　　1.產科無菌取臍帶1根，置于含保鮮液的廣口試劑瓶中4℃保存(避免污染)，在較短的時間內，將臍帶攜入實驗室，進行以下操作。
 

　　2.在超凈工作臺或無菌層流工作臺上，將臍帶用D-Hank溶液清洗干凈，將靜脈插管插入臍靜脈中，并用絲線結扎、固定。
 

　　3.用20ml注射器將37℃的D-Hanks溶液注入臍靜脈，反復沖洗至清洗液無色澄清為止。
 

　　4.用血管鉗夾住臍靜脈的另一端，并將0.2%的Ⅰ型或Ⅱ型膠原酶(約20ml)通過靜脈插管注入臍靜脈中，至臍靜脈充盈為止(排掉靜脈管中的空氣)。
 

　　5.將臍帶放置在盛有37℃水的玻璃燒杯中，在37°C水浴條件下消化約20min(每5min抽吸/注入1次)。
 

　　6.當酶液變成混濁時(在顯微鏡下可見大量游離細胞)，將酶液在臍靜脈中反復抽吸沖打3次后，吸出并置于50ml離心管中。
 

　　7.細胞懸液經350g離心5min后，棄去上清液，并用D-Hanks溶液清洗2次，然后再以350g離心5min。
 

　　8.棄去上清液，將細胞溶于8ml內皮細胞培養液(M l99 80ml、FBS 20ml、PS 1ml、L-Gln 2mM、ECGS 10mg/100ml、Heparan 4000U/1 00ml、Insulin mu/100ml)中，接種于預先包被2%明膠的T25培養瓶中。
 

　　9.細胞培養在37℃、5%CO2培養箱中，24h后換液，棄掉未貼壁細胞。之后每2~3d換液1次，待細胞匯合時消化傳代。