亚洲AV成人片无码网站玉蒲团,男人10处有痣是富贵痣,AV亚洲欧洲日产国码无码苍井空,日韩午夜欧美精品一二三四区

　　4T1-LUC(小鼠乳腺癌細胞)，引進ATCC細胞庫,確保細胞準確，提供STR鑒定報告，出庫附COA質檢報告，確保無支原體、細菌、酵母和真菌等。
 

　　4T1-LUC(小鼠乳腺癌細胞)培養操作：
 

　　1)復蘇細胞：將含有1 mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養基的培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入6 cm皿中，加入約4 mL培養基，培養過夜)。下一天換液并檢查細胞密度。
 

　　2)細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
 

　　a、棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
 

　　b、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02%EDTA)于培養瓶中，使消化液浸潤所有細胞，將培養瓶置于37℃培養箱中消化1-2 min(視細胞情況而定)，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加2-3ml*培養基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養液后吹勻。
 

　　c、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養基的新皿中或者瓶中，置于培養箱中培養。
 

　　3)細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例;
 

　　a、收集細胞，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數。
 

　　b、根據細胞數量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。
 

　　c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。